Инструкция по работе с биохимической тест системой

Определение родовой, видовой и таловой принадлежности микроорганизмов на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и антигенных свойств — наиболее ответственная часть микробиологического исследования.

Большое количество патогенов, принимающих участие в возникновении инфекционного процесса, обусловливает применение различных тестов по определению ферментативных свойств путем постановки большого количества биохимических реакций, что позволяет в комплексе с другими данными определить вид микроорганизма. Этот наиболее трудоемкий процесс выполняется в несколько этапов, требует большого количества дифференциально-диагностических сред, реактивов, посуды, что значительно удорожает стоимость анализа и удлиняет сроки его проведения. Результаты удается получить через 4…7 сут. Поэтому для идентификации микроорганизмов наиболее перспективны микрообъемные коммерческие тест-системы (МТС). Они избавляют практических бактериологов от трудоемких и дорогостоящих процедур и позволяют получать стандартные, сопоставимые, воспроизводимые данные, экономят реактивы, ускоряют выдачу результата анализа.

Коммерческие тест-системы для биохимической идентификации микроорганизмов различных групп представляют собой готовые к использованию полистироловые планшеты и панели с сухими дифференцирующими средами или субстратами, которые выпускаются разными производителями.

Коммерческие тест-системы на основе полистироловых планшетов. В Российской Федерации наибольшее распространение получили следующие тест-системы.

1. Микротест-системы (ФГУП НПО «Питательные среды», г. Махачкала) для идентификации микробов. Они представляют собой контейнер из прозрачного полистирола, состоящий из 12 одинаковых ячеек, которые содержат сухие питательные среды с различными углеводами, многоатомными спиртами, аминокислотами, солями неорганических кислот и индикатором pH, стабилизированные поливиниловым спиртом. Перечень выпускаемых МТС для идентификации микроорганизмов, имеющих ветеринарное назначение, включает в себя МТС-М-12Е (биохимическая идентификация энтеробактерий), МТС-5У (определение ферментативной активности энтеробактерий), МТС-С (биохимическая идентификация стафилококков), МТС-Стреп (биохимическая идентификация стрептококков), МТС-Л (биохимическая идентификация листерий), МТС-Сальм (биохимическая идентификация сальмонелл).

2. МТС («Плива-Лахема», Чехия) для биохимической идентификации энтеробактерий (ЭНТЕРО-тест 16; ЭНТЕРО-тест 24; ЭНТЕРО-скрин; ЭНТЕРО-Рапид 24), для энтерококков (ЭН-коккус-тест), стафилококков (СТАФИ-тест 16), стрептококков (СТРЕПТО-тест 16), анаэробов, выделенных из пищевых продуктов и кишечника (АНАЭРО-тест 23), бактериальной бета-лактамазной активности (бета-ЛАКТАМ-тест).

3. Одноразовые диагностические пластины (НПО «Диагностические системы», НИИЭМ, г. Нижний Новгород) ПБДБ (для идентификации энтеробактерий) и ПБДС (для идентификации стафилококков).

4. Системы на основе стандартных 96-луночных микротитровальных планшетов для идентификации энтеробактерий (ММТ-Е1 и ММТ-Е2) (Ставропольская государственная медицинская академия).

5. Наборы для ускоренной (в течение 5 ч) идентификации энтеробактерий РапидЭнтеро 200 и РапидЭнтеро 750 (НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург).

Помимо вышеперечисленных используют и зарубежные диагностические системы для идентификации различных микроорганизмов в течение 3…48 ч: API, ID (Bio Merieux, Франция), BBL Crystal (Becton Dikinson), «MicroScan» (Dade, США), MicroTax (Sy-Lab, Австрия).

Диагностические полоски и диски для биохимической идентификации микроорганизмов. Системы индикаторные бумажные (СИБ) представляют собой полоски или диски из хроматографической бумаги, пропитанные соответствующим субстратом и индикатором и покрытые для стабилизации водным раствором поливинилового спирта.

Реакцию ставят, как правило, пробирочным методом. В пробирку помещают 0,3 мл физиологического раствора или мясопептонного бульона, затем туда вносят петлей колонию изучаемого микроба и соответствующий диск. Учет реакции через 4…5 ч по изменению цвета бумажного диска. Срок годности СИБ составляет 1 год. СИБ для идентификации энтеробактерий производит НПО «Диагностические системы» (НИИЭМ, г. Нижний Новгород), коммерческие наборы СИБ для ускоренного определения колититра воды — ФГУП НПО «Питательные среды» (г. Махачкала). СИБ по сравнению с МТС гораздо дешевле, зато работа с ними требует больше труда и времени.

Могут быть использованы как дополнительные к планшетным, так и самостоятельно в качестве идентификационных диагностические полоски («Плива-Лахема» производит семь типов). Диагностические полоски представляют собой пластмассовые полоски, на одном конце которых наклеена полоска индикации из фильтровальной бумаги, содержащей субстрат для выявления бактериального фермента или метаболита. В зависимости от типа полосок бактериальную культуру или наносят непосредственно на зону индикации полоски, или ее опускают в пробирку с исследуемой бактериальной суспензией и выращивают в течение определенного времени. Перечень выпускаемых диагностических полосок включает в себя: 1) ОКСИ-тест (для выявления бактериальной цитохромоксидазы); 2) ОНР-тест (для обнаружения β-галактозидазы); 3) ГИППУРАТ-тест (для обнаружения способности бактерий гидролизовать гиппурат натрия, а также для предварительной идентификации стрептококков группы B и Campylobacter jejuni); 4) ПИРА-тест (для быстрого выявления активности фермента пирролидонилариламидазы), а также для дифференциации энтерококков (тест положительный) от стрептококков (за исключением S. pyogenes); 5) ВП-тест (для постановки реакции Фогэс—Проскауэра за 2…4 ч).

Помимо диагностических полосок можно использовать также диагностические диски («Плива-Лахема»), позволяющие проводить простую селективную изоляцию и дифференциацию бактерий прямо на питательной среде. Диски из фильтровальной бумаги содержат определенные концентрации высушенных реагентов для выявления специфической бактериальной активности.

1. Диски с бацитрацином (10 ЕД). Применяют для селективной изоляции Haemophilus spp. при первичном культивировании. Тест основан на устойчивости Haemophilus spp. к высоким концентрациям бацитрацина по сравнению с сопутствующей флорой и саттелитного роста микроорганизмов этого рода в зоне диффузии экзогенных факторов роста из культуры S. aureus.

2. Диски с бацитрацином S. Предназначены для предварительной индикации β-гемолитических стрептококков группы А (S. pyogenes). Тест основан на высокой чувствительности S. pyogenes к незначительным концентрациям бацитрацина (0,04 ЕД), обеспечивающей образование зон задержки роста вокруг диска. Другие β-гемолитические стрептококки резистентны к таким дозам или образуют незначительные зоны ингибиции роста.

3. Диски с оптохином. Предназначены для рутинной первичной индикации S. pneumoniae и дифференциации их от других зеленящих стрептококков. Принцип теста основан на избирательной чувствительности пневмококков к оптохину и резистентности к нему других зеленящих стрептококков.

Общие правила работы с МТС. Методика проведения микробиологических исследований с использованием МТС должна полностью соответствовать прилагаемой инструкции. Общая схема работы с тест-системами состоит из следующих этапов.

1. Выделение культуры. Для работы с МТС используют только чистые культуры. При их выделении особое внимание следует уделять качеству питательных сред. От этого зависит видовой состав изолированных микроорганизмов, их количество в исследуемом материале и успех идентификации. По результатам первичного посева и микроскопии проводят дифференциацию культур на грамположительные и грамотрицательные кокки и палочки.

2. Приготовление бактериальной суспензии. Суспензию готовят в рекомендованной суспензионной среде из чистой 18…24-часовой культуры определенной степени мутности согласно инструкции. Использование слишком густой или жидкой суспензии может привести к ложным результатам. Параллельно делают контрольный высев взвеси культуры на кровяной агар для проверки ее чистоты, ростовых свойств и (или) для постановки дополнительных тестов.

3. Инокуляция. Суспензию тщательно встряхивают; необходимый объем вносят в каждую лунку соответствующего ряда. После этого в определенные лунки для создания анаэробных условий добавляют по 2 капли стерильного вазелинового или парафинового масла.

4. Инкубация. Планшеты в полиэтиленовых пакетах или закрытые крышками инкубируют при 30…37 °С в течение 4…48 ч.

5. Оценка результатов. По окончании выращивания проверяют чистоту культуры по контрольному посеву. При отсутствии роста увеличивают время инкубации. Затем добавляют в определенные лунки необходимые реактивы, позволяющие визуализировать или усилить цветные реакции. Учет проводят визуально с помощью специальных таблиц, цветовых шкал и (или) цветных реакций контрольных штаммов и заносят их в бланки.

6. Идентификация. Проводят с помощью таблиц биохимической активности, индексов профилей, книг-кодов или компьютерных программ.

При окончательной идентификации учитывают дополнительную информацию (микроскопия, характер колоний, наличие гемолиза, пигментообразование, подвижность и т. д.).

При работе с тест-системами следует придерживаться следующих рекомендаций.

1. Строго соблюдать правила работы с инфицированным материалом.

2. После употребления МТС необходимо обезвреживать автоклавированием при (120+2) °С в течение 1 ч.

3. Строго соблюдать условия и сроки хранения в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам.

4. Если культуру не удается идентифицировать, следует проверить ее чистоту и повторить исследование.

5. При отсутствии роста на контрольной чашке необходимо увеличить время инкубации.

В современных условиях для изучения
биохимической активности микроорганизмов,
наряду с классическими варинтами
“пестрого ряда”, применяют системы
индикаторных бумажек (СИБ) и наборы
мультимикротестов (ММТ).

Система
индикаторных бумажек
(СИБ) позволяет выявлять самые разнообразные
ферменты бактерий. Это бумажные диски,
пропитанные различными субстратами
(индикатором, углеводами, аминокислотами,
цитратом, ацетатом, малонатом и др.
ве­ществами). Утилизация вещества
приводит к изменению рН среды, изме­нению
цвета индикатора. Имеются наборы, которые
содержат от десяти до тридцати
тест-бумажек.
Их можно непосредственно вносить в
пробирки со взвесью бактерий либо
предварительно
поместить в лунки пластиковых планшетов,
куда будут внесены исследуемые
бактерии
и уже через 3-4 часа инкубации в термостате
можно судить о разложении реактивов по
изменению цвета диска.
Так, на практике применяют наборы Minitek
Enterobacteriaceaelll
и
Minitek
Neisseria
для
дифференциальной диагностики
энтеробактерий (четырнадцать субстратов)
и
нейссерий
(четыре субстрата), позволяющие получить
результаты через 4 ч инкубации при
37
⁰С.
Например,
СИБы для идентификации вибрионов,
энтеробактерий (Россия).

Микро-тест-системы
для биохимической идентификации культур.
В
настоящее время, кроме классических
биохимических тестов, для идентификации
выделенных культур микробов применяют
микро-тест-системы, которые повышают
точность результатов за счет стандартизации
и увеличения количества тестов (от 15 до
30), менее трудоемки и, следовательно,
сокращают время исследования.Наборы мультитестов – это пластиковые
планшеты, в лунки которых помещены
различные субстраты и индикаторы.
Стандартную взвесь исследуемой культуры
вносят в лунки и инкубируют при 37°.

Тест-системы
делятся на 2 группы в зависимости от
содержания субстрата:

1. Системы,
   в которых субстрат и индикатор находится
   в питатель­ной среде;

2. Системы,
   где субстрат и индикатор содержатся в
   носителе-шаб­лоне, например в бумажных
   дисках или полимерном шаблоне-носителе.

Тест-системы
первой группы представляют
собой полистироло­вые пластины с
микрообъемными лунками, содержащие
обезвоженные дифференциально-диагностические
среды. Количество тестов в таких системах
составляет около 20 и более. Для небольших
лабораторий выпускаются индивидуальные
тест-системы, на которых идентифици­руют
одну культуру. В лунки вносят суспензию
испытуемой культуры в изотоническом
растворе, учет проводят после 18-24 часовой
инкубации. Примерами таких тест-систем
являются ПБДЭ и ПБДС («Диагности­ческие
системы», Г.Н.Новгород),
семейство систем API
(BioMerieux,
Франция), Enterotube
П (Becton
Dickinson,
США) и др. Для крупных лабораторий с
большим количеством исследуемых культур
имеются коммерческие тест-системы из
многорядных планшетов на 8-12 культур,
со­держащих до 96 лунок, например: ММТ
F.
1 и ММТ Е2 («Аллерген», г.
Ставрополь), ЭНТЕРО-тест 1 и 2 (Lachema,
Чехия).

Инкубация
тест-систем проводится в обычных
термостатах или в специальных
термостатируемых устройствах, входящих
в комплект автоматизированных систем,
где учет результатов и их интерпретация
осуществляется автоматически с помощью
компьютера (“Vitek”,
BioMerieux,
Франция).

Для
тест-систем второй группы изучаемую
культуру выращивают в жидких питательных
средах, в которые по­мещают
шаблон-носитель, содержащий субстрат
и индикатор к изу­чаемому ферменту.
Примером такой тест-системы является
Micro-ID
(Organon
Teknika,
США).

При
необходимости ускоренной идентификации
(когда лабо­ратории работают в
круглосуточном режиме) можно использовать
коммерческие
рапид-системы, в
которых тесты основаны не на изменении
рН, а на использовании хромогенных или
флюорогенных субстратов. Рапид-системы
позволяют получить результаты после
4-6 часов инкубации. Примерами коммерческих
рапид-систем являются API
Rapid
20Е (BioMerieux,
Франция), RapiD
NF
Plus
и RapiD
ANA
П (IDS.
США),
а также RapID
NH
для идентификации нейссерий и гемофилов,
RapID
Е для энтеробактерий и др., позволяющие
получить результаты не позднее 4-8 ч.

При
идентификации
выделенной
культуры микроба определяют, чаще всего,
ее видовую принадлежность, но иногда
достаточно опреде­лить род или
принадлежность к определенной группе.
Учет результатов проводят визуально
или с использованием специальных
считывающих устройств — ридеров, которые
повышают достоверность результатов и
снижают субъективизм оценки. Каждый
положительный результат оценивается
знаком «+», а отрицательный — знаком
В некоторых случаях перед учетом
результата теста в лунку необходимо
добавить специальные проявляющие
реактивы.

Фирмы,
выпускающие микро-тест-системы, как
правило, предла­гают к тестам и
«Фирменные» программы для компьютерной
обработки результатов.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

Содержание

• Классификация
• Универсальный
• пример
• Дифференциалы
• пример
• Конкретный
• пример
• Виды биохимических тестов
• Каталазный тест
• Оксидазный тест
• Тест с соленым маннитоловым агаром (MSA)
• Коагулазный тест
• Тест на уреазу
• Для чего нужны биохимические тесты?
• Важность
• Ссылки

В Биохимические тесты в микробиологии они представляют собой набор химических тестов, которые проводятся на микроорганизмах, присутствующих в образце, с целью их идентификации; эти микроорганизмы обычно являются бактериями. Микробиологу доступно большое количество биохимических тестов.

Однако выбор этих тестов основан на предварительных результатах, таких как образец окраски по Граму и признаки роста, которые позволяют отнести бактерии к определенной категории. Биохимические тесты в основном основаны на метаболических свойствах каждого типа бактерий.

Не все бактерии обладают одинаковыми свойствами, поэтому исследуют, есть ли у них какой-либо конкретный фермент, добавляя субстрат и ожидая реакции. Обычно это определение дается по изменению цвета или pH культуральной среды.

Для надежной идентификации бактерии на уровне вида часто требуется менее 15 биохимических тестов. Проведение большего количества биохимических тестов может повысить уверенность в идентификации.

Большинство этих биохимических тестов проводится на сыворотке или плазме крови. Однако они также могут выполняться с другими биологическими выделениями, такими как моча, спинномозговая жидкость, плевральная жидкость и фекалии, среди прочего.

Классификация

Биохимические тесты можно разделить на 3 группы:

Универсальный

Это тесты, которые можно выполнить на любом образце и которые направляют микробиолога на следующие биохимические тесты, которые необходимо выполнить для получения надежной идентификации.

пример

Каталазно-оксидазный тест.

Дифференциалы

Это тесты, проводимые для выявления микроорганизмов, присутствующих в образце, вплоть до видового уровня.

Идентификация производится по результатам комбинации тестов, поскольку отдельные результаты недостаточно информативны для идентификации.

пример

Тесты IMViC и тесты на утилизацию сахара.

Конкретный

Это специальные тесты для определенного набора видов или для подтипа видов. Эти тесты обычно проводятся для подтверждения или идентификации на уровне подвидов. Отдельные тесты информативны сами по себе.

пример

Тест на γ-глутамиламинопептидазу.

Виды биохимических тестов

Каталазный тест

Тест на каталазу — это тест, демонстрирующий присутствие фермента каталазы путем разложения перекиси водорода на кислород и воду. К капле перекиси водорода (3%) на предметном стекле добавляется небольшое количество бактерий.

Тест на каталазу — это простой тест, используемый микробиологами для определения видов бактерий и определения способности некоторых микробов расщеплять перекись водорода путем выработки фермента каталазы.

Если наблюдаются пузырьки кислорода, это означает, что у бактерий есть фермент каталаза, потому что он катализирует разложение перекиси водорода на кислород и воду. В таком случае говорят, что организм является каталазоположительным (например: Золотистый стафилококк).

Оксидазный тест

Этот тест используется для идентификации микроорганизмов, содержащих фермент цитохромоксидазу (важный в цепи переноса электронов). Он обычно используется для различения семейств Enterobacteriaceae и Pseudomadaceae.

Цитохромоксидаза переносит электроны из цепи переноса электронов на кислород (конечный акцептор электронов) и восстанавливает его до воды. В оксидазном тесте используются искусственные молекулы донора и акцептора электронов.

Когда донор электронов окисляется под действием цитохромоксидазы, среда становится темно-фиолетовой и считается положительным результатом. Микроорганизм Синегнойная палочка это пример бактерии с положительной оксидазой.

Тест с соленым маннитоловым агаром (MSA)

Этот тип теста бывает как выборочным, так и дифференциальным. MSA выберет организмы, способные жить в среде с высокой концентрацией соли, например, виды Стафилококк в отличие от видов Стрептококк, рост которых в этих условиях тормозится.

Дифференциальный компонент в этом тесте — сахар маннит. Организмы, способные использовать маннит в качестве источника пищи, будут производить побочные продукты ферментации, которые являются кислыми и, таким образом, понижают pH среды.

Из-за кислотности среды индикатор pH, феноловый красный, становится желтым. Примеры видов бактерий, которые можно дифференцировать с помощью этого метода: Золотистый стафилококк (положительно, потому что маннитол ферментирует) и Эпидермальный стафилококк (отрицательно, потому что маннит не ферментирует).

Коагулазный тест

Коагулаза — это фермент, который способствует свертыванию плазмы крови. Этот тест проводится на грамположительных и каталазоположительных бактериях для идентификации Золотистый стафилококк (коагулаза положительная). Фактически, коагулаза является фактором вирулентности этого вида бактерий.

Образование сгустка вокруг инфекции, вызванной этой бактерией, вероятно, защищает ее от фагоцитоза. Этот тест очень полезен, когда вы хотите различать Золотистый стафилококк других видов Стафилококк коагулазо-отрицательные.

Тест на уреазу

Этот тест используется для выявления бактерий, способных гидролизовать мочевину с помощью фермента уреазы. Обычно используется для различения пола Протей от других кишечных бактерий.

При гидролизе мочевины одним из продуктов является аммиак. Это слабое основание увеличивает pH среды выше 8,4, и индикатор pH (феноловый красный) изменяется с желтого на розовый. Примером уреазоположительных бактерий является Протей мирабилис.

Для чего нужны биохимические тесты?

Биохимические тесты в микробиологии используются для диагностики заболеваний, вызванных микробами, и для мониторинга лечения, применяемого для борьбы с ними. Кроме того, они используются для выявления инфекционных заболеваний и их прогноза.

Биохимическая идентификация микроорганизмов дает представление о том, что эти микроорганизмы способны делать, будучи возможной дискриминацией различных штаммов одного и того же вида по определенным биохимическим профилям.

Различия в активности конкретных ферментов определяют экологию, физиологию или естественную среду обитания микроорганизмов, что в некоторых случаях может считаться важной информацией.

Важность

Структурные различия в форме, размере и расположении бактерий мало помогают в процессе идентификации, потому что существует множество видов бактерий, похожих по форме, размеру и расположению.

По этой причине идентификация бактерий в конечном итоге основана в первую очередь на различиях в их биохимической активности.

У каждого вида бактерий есть четко определенный набор метаболической активности, отличный от всех других видов. Эти биохимические «отпечатки пальцев» — это свойства, контролируемые бактериальными ферментами.

Таким образом, биохимические тесты важны, потому что они помогают исследователю правильно идентифицировать патогены, присутствующие в образце, и, таким образом, иметь возможность рекомендовать соответствующее лечение пациенту.

Ссылки

1. Беккет, Г., Уокер, С., Рэй, П. (2010). Клиническая биохимия (8-е изд.). Вили-Блэквелл.
2. Кларк П. Х. и Коуэн С. Т. (1952). Биохимические методы бактериологии. Журнал общей микробиологии, 6(1952), 187–197.
3. Гоу, А., Мерфи, М., Шривастава, Р., Коуэн, Р., Сент, Д. и О’Рейли, Дж. (2013). Клиническая биохимия (5-е изд.). Elsevier Health Sciences.
4. Гольдман, Э. и Грин, Л. (2008). Практическое руководство по микробиологии (2-е изд.). CRC Press.
5. Харриган, В. (1998). Лабораторные методы пищевой микробиологии (3-е изд.). Академическая пресса.
6. Васантакумари, Р. (2009). Практическая микробиология. BI Publications Pvt Ltd.

ГОСТ Р 8.891-2015

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Государственная система обеспечения единства измерений

ИЗМЕРИТЕЛЬНЫЕ И ИНДИКАТОРНЫЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ

Технические и метрологические требования. Основные положения

State system for ensuring the uniformity of measurements. Measuring and indicating biochemistry test systems. Technical and metrological requirements. Basic principles

ОКС 11.100

          17.020

Дата введения 2016-07-01

 Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы» (ФГУП «ВНИИМС»)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 53 «Основные нормы и правила по обеспечению единства измерений»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ

Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 августа 2015 г. N 1208-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2019 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в

статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации» . Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

 Введение

Настоящий стандарт разработан с целью формулирования единых требований к измерительным и индикаторным биохимическим тест-системам, несоблюдение которых может привести к искажениям результатов измерений.

«Измерительные биохимические тест-системы», рассматриваемые в настоящем стандарте, являются средствами измерений. Термин «измерительные биохимические тест-системы», вводимый настоящим стандартом, отличается от термина «тест-системы», используемого в области лабораторной диагностики. Термин «тест-системы» означает наборы реагентов для иммуноферментных, иммунохимических по

ГОСТ Р 51088-2013  «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации», иммунохроматографических анализов. «Тест-системами» также называют тест-полоски, индикаторные диски и другие индикаторы. Такие «тест-системы» средствами измерений не являются.

Настоящий стандарт разработан для применения производителями и пользователями измерительных и индикаторных биохимических тест-систем. Измерительные биохимические тест-системы применяются пользователями, имеющими специальное образование и имеющими опыт работы с такими средствами измерений, для определения содержания компонентов в указанных диапазонах с установленными границами допускаемой погрешности.

Индикаторные биохимические тест-системы могут применяться пользователями, не имеющими опыта их применения и специального образования.

      1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает технические и метрологические требования к биохимическим тест-системам, применяемым при биохимическом анализе содержания компонентов в растворах или в биологических жидкостях и тканях, и предназначен для применения разработчиками и пользователями измерительных и индикаторных тест-систем.

Стандарт распространяется:

— на измерительные биохимические тест-системы;

— на индикаторные биохимические тест-системы.

Настоящий стандарт не содержит требований к полуколичественным тест-системам, реактивам и реагентам.

      2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 2.601  Единая система конструкторской документации. Эксплуатационные документы

ГОСТ 8.010  Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений. Основные положения

ГОСТ 12.1.005  Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ Р 8.563  Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений

ГОСТ Р 8.654  Государственная система обеспечения единства измерений. Требования к программному обеспечению средств измерений. Основные положения

ГОСТ Р 51088  Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с указанным всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

      3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1

аналит: Компонент пробы, указанный в названии исследуемого свойства или измеряемой величины. [ ГОСТ Р 51352-2013 , статья 3.1]

3.2

аттестация методик измерений: Исследование и подтверждение соответствия методик измерений установленным метрологическим требованиям к измерениям. [ [2 ], статья 9.17]

3.3 биологический материал: Биологические жидкости организма — слюна, моча, пот и ткани — кровь (плазма, сыворотка), включая их пробоподготовку или исключая ее.

3.4 биохимические методы анализа: Методы обнаружения и определения тех или иных веществ, в основе которых лежат биохимические процессы, т.е. трансформация одних соединений в другие или образование межмолекулярных комплексов с участием специфических биологических молекул — ферментов, антител, рецепторов и др.

Примечание — К биохимическим методам анализа также относятся иммунохимические методы, включая иммуноферментный, иммунохроматографический, иммунофлуоресцентный и др. методы анализа.

3.5

величина: Свойство материального объекта или явления, общее в качественном отношении для многих объектов или явлений, но в количественном отношении индивидуальное для каждого из них. [ [2] , статья 3.1]

Примечание — К величинам, например, относятся: концентрация (аналита), объем (пробы), площадь (поверхности), масса (образца) и т.д.

3.6 влияющая величина: Физическая величина, которая не является объектом измерений, но которая оказывает влияние на значение измеряемой величины.

3.7 время срабатывания: Промежуток времени от начала использования тест-системы до получения различимого на фоне шумов сигнала.

3.8 измерительные биохимические тест-системы (измерительные тест-системы): Набор из одного или более средств измерений, представляющих собой устройства детекции и обработки измерительного сигнала (ридеров), одного или нескольких индикаторов и аттестованной методики измерений. Измерительные биохимические тест-системы позволяют количественно определить содержание (концентрацию) компонента в растворе или в биологической жидкости (например, методом калибровочных кривых).

Примечания

1 Определение термина «измерительные биохимические тест-системы» сформулировано с учетом определения «измерительной системы», приведенного в международном словаре VIM3 [1]*.

2 Введенный термин «измерительные биохимические тест-системы» отличается от термина «тест-системы», используемого в области лабораторной диагностики. Термин «тест-системы» означает наборы реагентов для иммуноферментных, иммунохимических по

ГОСТ Р 51088 , иммунохроматографических анализов. «Тест-системами» также называют тест-полоски, индикаторные диски и другие индикаторы. Такие «тест-системы» средствами измерений не являются.

3.9 индикатор: Техническое средство или вещество, предназначенное для установления наличия какой-либо физической величины или превышения уровня ее порогового значения.

Примечание — Определение «индикатор» относится к тест-полоскам, индикаторным дискам, сухим таблетированым формам и т.п.

3.10 индикаторные биохимические тест-системы (индикаторные тест-системы): Системы, предназначенные для определения присутствия или отсутствия компонента в растворе или в биологической жидкости.

Примечания

1 К операторам, осуществляющим работу с индикаторными тест-системами, не предъявляются требования по квалификации.

2 Получение результатов анализа посредством индикаторных тест-систем не требует сложной пробоподготовки.

3.11 калибровочная (градуировочная) кривая: Аппроксимирующая зависимость между значениями величин на выходе и входе средства измерений (ридера), полученная на основе экспериментальных данных.

3.12

методика измерений: Установленная логическая последовательность операций и правил при измерении, выполнение которых обеспечивает получение результатов измерений в соответствии с принятым методом измерений. [ [2] , статья 4.11]

3.13

неопределенность (измерений): Неотрицательный параметр, характеризующий рассеяние значений величины, приписываемых измеряемой величине на основании измерительной информации. [ [2] , статья 5.34]

3.14

нормальные условия измерений: Условия измерений, предписанные для оценивания характеристик средства измерений или измерительной системы или для сравнения результатов измерений. [ [2] , статья 7.43]

3.15

погрешность (результата измерения): Разность между измеренным значением величины и опорным значением величины. [ [2] , статья 5.16]

Примечание — Определение «порог чувствительности тест-системы» сформулировано с учетом его определения, приведенного в

[2] .

3.17 пороговое значение концентрации (пороговая концентрация): Значение концентрации компонента, ниже которой вещество считается отсутствующим в растворе или в биологической жидкости, а при превышении данной концентрации — присутствующим.

3.18 пробоподготовка: Совокупность действий над пробой (измельчение, гомогенизация, экстракция, гидролиз, осаждение и пр.) с целью превращения пробы в подходящую для последующего анализа форму (сухой остаток, раствор и пр.), состояние вещества (основание, солевая форма, гидролиз конъюгатов и пр.), а также для концентрирования/разбавления аналита и избавления от мешающих анализу компонентов.

3.19

прослеживаемость: Свойство результата измерения, в соответствии с которым результат может быть соотнесен с основой для сравнения через документированную непрерывную цепь калибровок, каждая из которых вносит вклад в неопределенность измерений. [ [2] , статья 9.2]

Примечание — Определение соответствует определению, приведенному в международном словаре VIM3 [1], статья 2.41.

3.20 селективность метода анализа: Возможность метода определять или обнаруживать искомый компонент в присутствии других сопутствующих компонентов.

3.21

чувствительность тест-системы: Отношение изменения показаний средства измерения к вызывающему его изменению измеряемой величины. [ [2] , статья 7.39]

      4 Общие положения

4.1 Характеристики биохимических тест-систем должны соответствовать требованиям, установленным в документации на биохимические тест-системы.

4.2 Реакции, лежащие в основе принципа действия биохимических тест-систем, должны быть селективными по отношению к определяемым компонентам или их сумме в зависимости от поставленной задачи и быстропротекающими.

4.3 Для индикаторных биохимических тест-систем при использовании цветных реакций в качестве индикации (для визуальной оценки), границы раздела окрашенных зон должны быть четкими, иметь высокую контрастность по отношению к фону подложки (в присутствии определяемого вещества).

4.4 Проведение измерений с помощью биохимических тест-систем должно соответствовать требованиям безопасности, установленным соответствующими

правилами по охране труда  [3], и требованиям по охране окружающей среды, установленным в соответствующем

Федеральном законе  [4].

      5 Метрологические и технические требования к измерительным биохимическим тест-системам

Измерительные биохимические тест-системы являются средствами измерений. Метрологические требования к средствам измерений устанавливаются

Федеральным законом  [5].

      5.1 Метрологические требования к измерительным биохимическим тест-системам

5.1.1 В добровольном порядке изготовители и пользователи измерительных тест-систем могут предоставлять их на утверждение типа в соответствии с

Федеральным законом  [5] (

статья 12 ). На поверку/калибровку измерительные тест-системы предоставляются в добровольном порядке в соответствии с

Федеральным законом  [5] (

статьи 13  и

18 ).

5.1.2 Метрологическими характеристиками измерительных биохимических тест-систем являются:

— чувствительность;

— порог чувствительности;

— время срабатывания;

— пороговая концентрация;

— прослеживаемость;

— погрешность (неопределенность) измерений;

— диапазон измерений;

— калибровочная кривая или набор калибровочных кривых для каждого типа измерительных тест-систем и для каждого аналита.

5.1.2.1 Порог чувствительности не должен превышать пороговую концентрацию.

5.1.2.2 Фактическое время срабатывания измерительных тест-систем должно соответствовать времени срабатывания, указанному в сопроводительной документации к измерительным тест-системам.

5.1.2.3 Результаты измерений, полученные посредством измерительных биохимических тест-систем, должны быть прослеживаемы через цепь непрерывных калибровок к государственным или международным первичным эталонам единиц величин международной системы единиц (СИ).

В случае, если свойства биологического материала не могут быть выражены в единицах СИ, допускается прослеживать результаты измерений к внесистемным международным единицам. Тем не менее, на каждом этапе измерений должны быть получены значения, которые прослеживаются до соответствующей единицы СИ.

5.1.2.4 Значение погрешности (неопределенности) результатов измерений, получаемых с помощью измерительных тест-систем, должно соответствовать значению, указанному в сопроводительной документации к измерительным тест-системам.

5.1.2.5 Диапазон измерений измерительных тест-систем должен содержать пороговую концентрацию и быть достаточным для получения достоверного результата измерений.

5.1.2.6 Измерительные биохимические тест-системы должны иметь калибровочную кривую или набор калибровочных кривых для каждого типа измерительных тест-систем и для каждого определяемого посредством измерительных тест-систем компонента.

5.1.2.7 Основная погрешность измерений измерительных тест-систем должна находиться в установленных пределах при нормальных условиях. При воздействии влияющих величин нормируется дополнительная погрешность измерений.

      5.2 Технические требования к измерительным биохимическим тест-системам

К техническим требованиям к измерительным биохимическим тест-системам относятся:

— назначение, определяющее основные функции измерительных тест-систем;

— указание анализируемой величины;

— указание вида биологического материала, используемого для анализа;

— срок годности;

— габаритные размеры;

— требования к безопасности измерительных тест-систем;

— масса ридера;

— потребляемая мощность ридера;

— количество индикаторов;

— сведения об утилизации измерительной тест-системы и ее составных частей;

— условия применения, транспортирования и хранения.

      5.3 Требования к документации на измерительные биохимические тест-системы

5.3.1 Измерительные биохимические тест-системы должны сопровождаться соответствующей документацией, в том числе эксплуатационной по

ГОСТ 2.601 . Документация должна полно и однозначно описывать назначение, метрологические и технические характеристики измерительных тест-систем. При проверке документации в обязательном порядке должна происходить проверка соответствия сопроводительной документации требованиям 5.3.2-5.3.5.

5.3.2 Минимальный набор документов, сопровождающих измерительные тест-системы, должен содержать следующие документы:

— паспорт;

— инструкцию по применению;

— методики (методы) измерений, аттестованные в установленном порядке, если они не включены в инструкцию по применению;

________________

5.3.3 В паспорте отображают метрологические и технические требования, а также следующую информацию:

— наименование измерительных биохимических тест-систем;

— назначение;

— сведения об изготовителе;

— указание анализируемой величины;

— указание вида биологического материала, используемого для анализа;

— дату изготовления;

— номер серии, номер и дату выдачи паспорта;

— гарантии изготовителя;

— срок годности;

— габаритные размеры;

— требования к безопасности измерительных тест-систем;

— массу ридера;

— потребляемую мощность ридера;

— количество индикаторов;

— сведения о сертификации измерительной тест-системы и ее составных частей;

— сведения об утилизации измерительной тест-системы и ее составных частей;

— чувствительность;

— порог чувствительности;

— пороговую концентрацию;

— время срабатывания;

— прослеживаемость;

— погрешность (неопределенность) измерений;

— диапазон измерений;

— калибровочную кривую или набор калибровочных кривых для каждого типа измерительных биохимических тест-систем и для каждого определяемого посредством измерительных тест-систем компонента;

— сведения о поверке;

— условия применения, транспортирования и хранения.

5.3.4 Инструкция по применению должна содержать:

— назначение;

— метрологические и технические характеристики измерительной биохимической тест-системы;

— условия хранения;

— условия применения;

— меры предосторожности при работе с измерительными тест-системами;

— оборудование и материалы, необходимые при работе с измерительными тест-системами;

— аналиты и вид биологического материала (при необходимости);

— условия применения, транспортирования и хранения;

— ссылку на методики (методы) измерений, по которым проводятся данные измерения;

— руководство оператора ридера;

— руководство пользователя программного обеспечения ридера;

— сведения о наличии и характеристиках ПО в соответствии с

ГОСТ Р 8.654 , сведения об уровне защиты ПО в соответствии с

рекомендациями  [6].

5.3.5 Методики (методы) измерений должны соответствовать требованиям

ГОСТ Р 8.563  и

ГОСТ 8.010  и быть аттестованы согласно

ГОСТ Р 8.563  и

[7] . Документация на методику (метод) измерений должна содержать:     

— наименование методики (метода) измерений;

— назначение и область применения методики (метода) измерений;

— условия выполнения измерений;

— требования к квалификации операторов;

— требования к обеспечению безопасности выполняемых процедур, экологической безопасности и др.;

— требования к показателям точности измерений;

— применяемые средства измерений;

— требования к вспомогательным устройствам, материалам и реактивам (при необходимости);

— описание подготовки измерительной биохимической тест-системы для анализа (при необходимости);

— пошаговое описание процедуры проведения измерений;

— операции обработки результатов измерений (при необходимости);

— процедуры и периодичность контроля точности получаемых результатов анализа.

      6 Характеристики и технические требования к индикаторным биохимическим тест-системам

Индикаторные биохимические тест-системы не являются средствами измерений, поэтому к ним не предъявляются обязательные метрологические требования.

      6.1 Характеристики индикаторных биохимических тест-систем

6.1.1 Характеристики индикаторных биологических тест-систем могут быть подтверждены в добровольном порядке.

Характеристиками индикаторных биологических тест-систем являются:

— порог чувствительности;

— время срабатывания;

— пороговая концентрация.

6.1.2 Результатом анализа, проводимого с помощью индикаторных тест-систем, должно быть однозначное определение присутствия или отсутствия компонента в пробе и (или) в биологической жидкости или ткани.

6.1.3 Порог чувствительности не должен превышать пороговую концентрацию.

6.1.4 Фактическое время срабатывания должно соответствовать времени срабатывания, указанному в сопроводительной документации к индикаторным тест-системам

      6.2 Технические требования к индикаторным биохимическим тест-системам

К техническим требованиям к индикаторным тест-системам относятся:

— назначение, определяющее основные функции индикаторных тест-систем;

— указание анализируемой величины;

— указание вида биологического материала, используемого для анализа;

— срок годности;

— габаритные размеры;

— количество индикаторов;

— сведения об утилизации индикаторной тест-системы и ее составных частей;

— условия применения, транспортирования и хранения.

      6.3 Требования к документации на индикаторные биохимические тест-системы

6.3.1 Индикаторные биохимические тест-системы должны сопровождаться документацией, соответствующей требованиям

ГОСТ 2.601 . Документация должна полно и однозначно описывать назначение и технические характеристики индикаторных тест-систем. При проверке документации в обязательном порядке должна происходить проверка соответствия сопроводительной документации требованиям 6.3.2-6.3.4.

6.3.2 Минимальный набор документов, сопровождающих индикаторные биохимические тест-системы, рекомендуется представлять в следующем составе:

— паспорт;

— инструкция по применению.

6.3.3 В паспорте отображают технические требования и следующую информацию:

— наименование индикаторных биохимических тест-систем;

— назначение;

— сведения об изготовителе;

— указание анализируемой величины;

— указание вида биологического материала, используемого для анализа;

— дату изготовления;

— номер серии, номер и дату выдачи паспорта;

— гарантии изготовителя;

— срок годности;

— габаритные размеры;

— количество индикаторов;

— требования к безопасности индикаторных тест-систем;

— сведения о сертификации изделия;

— сведения об утилизации изделия;

— пороговую концентрацию;

— порог чувствительности;

— время срабатывания;

— условия применения, транспортирования и хранения.

6.3.4 Инструкция по применению индикаторных биохимических тест-систем должна содержать следующие разделы:

— назначение;

— меры предосторожности при работе с индикаторными тест-системами;

— оборудование и материалы, необходимые при работе с индикаторной тест-системой;

— анализируемые растворы или биологические жидкости и ткани (при необходимости);

— подготовка индикаторных тест-систем для анализа (при необходимости);

— описание процедуры проведения анализа;

— условия применения, транспортирования и хранения.

      7 Требования безопасности

7.1 Биохимические тест-системы должны быть безопасными для пользователей, а также для окружающей среды.

7.2 В эксплуатационной документации и технических условиях на биохимические тест-системы, при необходимости, должны быть указаны возможные виды опасности, а также требования и средства обеспечения безопасности при их использовании.

7.3 При работе с биохимическими тест-системами следует соблюдать требования, установленные

правилами по охране труда  [3].

      8 Требования к охране окружающей среды

8.1 При работе с биохимическими тест-системами следует соблюдать требования, установленные Федеральным законом

[4] .

8.2 Биохимические тест-системы не должны быть источниками опасных излучений и выделений вредных веществ, загрязняющих окружающую среду выше норм, установленных в

ГОСТ 12.1.005 .

8.3 В технических условиях и эксплуатационной документации на тест-системы должны быть установлены требования к утилизации изделия.

 Библиография

[1]	JCGM 200:2008*	International vocabulary of metrology — Basic and general concepts and associated terms (VIM3) (Международный словарь терминов по метрологии. Основные и общие понятия и соответствующие термины (VIM3))
[2]	Рекомендации по межгосударственной стандартизации РМГ 29-2013	Государственная система обеспечения единства измерений. Метрология. Основные термины и определения
[3]	Приказ Министерства труда и социальной защиты Российской Федерации от 24 июля 2013 г. N 328н «Об утверждении Правил по охране труда при эксплуатации электроустановок»
[4]	Федеральный закон Российской Федерации от 10 января 2002 г. N 7-ФЗ «Об охране окружающей среды»
[5]	Федеральный закон Российской Федерации от 26 июня 2008 г. N 102-ФЗ «Об обеспечении единства измерений»
[6]	Рекомендации по метрологии Р 50.2.2.077-2014*	Государственная система обеспечения единства измерений. Испытания средств измерений в целях утверждения типа. Проверка защиты программного обеспечения
[7]	Рекомендации по межгосударственной стандартизации ПМГ 126-2013	Государственная система обеспечения единства измерений. Порядок аттестации методик выполнения измерений и их применения в сферах законодательной метрологии государств — участников Содружества Независимых Государств

УДК 543.9:006.354	ОКС 11.100
	17.020
Ключевые слова: средство измерений, биохимические тест-системы, измерительные тест-системы, индикаторные тест-системы, метрологические характеристики, технические характеристики