Какие тесты бывают на ВИЧ?
Для скрининга применяется метод ИФА. Для подтверждения диагноза применяется иммуноблот. Подробнее — ниже.
Для выявления ВИЧ в некоторых ситуациях применяется качественный (т.е. есть или нет, без ответа на вопрос «сколько?») ПЦР РНК или ДНК ВИЧ, данный метод является на сегодня вспомогательным и его не следует использовать для скрининга ВИЧ-инфекции. У лиц с диагностированной ВИЧ-инфекцией применяется количественный метод ПЦР на РНК ВИЧ, он позволяет ответить на вопрос сколько вируса в крови. Его так же не следует применять для диагностики.
В чем отличие диагностики 3-го и 4-го поколений:
3-е поколение выявляет только антитела — ответную реакцию организма на вирус. Антитела появляются всегда с некоторой задержкой после инфицирования — организму нужно время, чтобы их выработать. Обычно этот период занимает 3-6 недель после инфицирования — это так называемый «период окна».
4-е поколение выявляет как антитела, так и антиген p24 — фрагмент самого вируса ВИЧ.
Тест 4-е поколения показывает положительный результат, когда концентрация вируса становится достаточной для его обнаружения, в большинстве случаев это происходит еще до появления антител.
Важно отметить, что диагностика 4-го поколения определяет ВИЧ в острой стадии инфицирования — когда вирус уже находится в крови и сперме зараженного человека в большой концентрации, а антител еще нет.
Вероятность передачи вируса половым путем от человека на острой стадии инфекции оценивается в 10 раз выше, чем от людей с хронической ВИЧ-инфекцией. При этом проверка человека в острой фазе диагностикой 3-го поколения выдаст отрицательный результат.
Если обнаружен антиген p24 (белок вируса)?
Если обнаружен антиген p24 (белок вируса) это говорит о недавнем заражении от двух недель до 2 месяцев до сдачи анализа. Данный антиген p24 обнаруживается как правило только в начальной стадии (острой) ВИЧ инфекции когда еще в крови нет или мало антител IgM и IgG затем он исчезает.
Сейчас разрабатываются (сверхчувствительные к белку p24) тест системы ИФА 4 поколения способные выявлять ВИЧ на сроке начиная с 10-12 дней с момента инфицирования, т.е. раньше чем ПЦР.
Выявляет ли ИФА тест 4 поколения ВИЧ-2?
Да, все современные специализированные ИФА-системы выявляют ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
Какой период «окна» для тестов 4 поколения?
Тест-системы 4 поколения способны обнаружить не только антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию, но и непосредственно ВИЧ, посредством выявления вирусного белка p24. Белок p24 может быть определен очень рано, но его уровень в крови в период после инфицирования постепенно снижается, но одновременно с этим снижением нарастает уровень антител. Все люди разные, потому назвать точный 100% минимальный срок, когда сомневаться в тесте уже нет поводов — невозможно. Однако, на сегодня есть достаточное количество исследований, которые дают нам весьма определенные ориентиры — лабораторные ИФА-системы 4 поколения с очень высокой вероятностью «не пропустят» ВИЧ-инфекцию уже через месяц поле инфицирования.
Может быть так, что антиген уже связан антителами, а антител еще мало для теста?
Антиген никуда не исчезает, ведь вирус размножается, сам находится в крови, а так же клетки, погибшие от ВИЧ разрушаются и выделяют много антигена в кровь, однако к моменту когда сероконверсия состоялась, т.е. когда пошла выработка антител — весь антиген в крови находится в связанной форме, т.е. в виде комплексов антигена с антителом. Такие иммунные комплексы тест-системы ИФА выявить уже не могут, потому что диагностические антитела из набора реагентов теста не могут связать уже связанный в иммунном комплексе антиген . Есть однако работы, в которых эти иммунные комплексы выделяют из крови для изучения в лабораториях. Поэтому говорят что тест-система 4-го поколения ИФА может выявлять именно СВОБОДНЫЙ антиген р24. Свободным он бывает в начале инфекции, когда антител еще нет, и в так называемой терминальной стадии, когда вирусная нагрузка увеличивается а иммунитет ослабевает настолько, что снова появляется НЕСВЯЗАННЫЙ с антителами антиген, который можно диагностировать.
Этот феномен описан, но это весьма короткоживущий феномен, по сути это точка пересечения двух условных кривых, никто вам не скажет, это часы или десятки минут, но точно не многие дни, скорее следует предполагать как максимум (предположение, для утверждения не достаточно данных) 1-2 суток. И в любом случае этот феномен, если и возникает, то находится там, где мы вообще из осторожности не говорим о полной достоверности тестирования, т.е. внутри первых 4-6 недель, и с очень высокой долей вероятности этот период внутри еще более короткого промежутка — в пределах первых двух недель, т.е. мы как бы укладываем оба окна одно в другое. Плюс, по всей видимости, есть некоторые условия, которые хоть сколько то значимыми делают вероятность «подловить» это самое второе окно — исходные иммунодефицитные состояния, например, связанные с возрастом.
Так все же, с какого срока ИФА 4 поколения совершенно надежно исключает ВИЧ?!!!
Тест 4 поколения может в отдельных случаях выявлять ВИЧ-инфекцию уже через неделю после инфицирования, но ориентироваться на это все же нельзя, потому как это скорее исключение. Месяц — вполне надежный срок для современных лабораторных тест-систем.
Если Вы считаете, что у Вас был рискованный контакт, то сделайте ИФА после 6 неделе после опасного контакта — достоверность отрицательного результата будет предельно близка к 99,9%. Многие эксперты считают срок в 6 недель для ИФА 4 поколения в условиях лаборатории совершенно достаточным для исключения ВИЧ-инфекции.
Может ли что-то вызывать ложноотрицательный результат (-) в тесте на ВИЧ?
Ложноотрицательный результат, а точнее существенное удлинение «периода окна» теоретически может вызвать начатая очень рано после инфицирования антиретровирусная терапия, а также некоторые тяжелые заболевания иммунной системы.
Алкоголь, иные психоактивные вещества, любая пища, БАДы, иммуностимуляторы, иммуномодуляторы, антибиотики и любые иные препараты, стресс, усталость, общая болезненность и ослабленный иммунитет, грипп, ангина и прочие заболевания — все это не оказывает значимого влияния на риски ложноотрицательного результата теста на ВИЧ.
А может ли быть ложноположительный результат (+) на ВИЧ при некоторых заболеваниях?
Да, такая вероятность всегда существует. Есть состояния (беременность, например) или заболевания (ряд аутоиммунных заболеваний, заболевания печени и другие), когда вероятность ложноположительного результат возрастает, также такие риски несколько увеличивает недавние вакцинирование некоторыми иммунопрепаратами.
Методом ИФА ВИЧ-2 выявляется позднее, это так?
В данном случае это не имеет значения, антитела выходит на уровень достаточный для детекции примерно в одни и те же временные рамках, общие перестраховочные сроки 6-8 недель от опасного контакта «накрывают» и ситуации с ВИЧ-1 и с ВИЧ-2.
Если ИФА положительный, то это означает диагноз ВИЧ-инфекции?
Нет, требуется подтверждение другим методом. Подтверждающим методом для диагностики ВИЧ-инфекции сегодня является непрямая иммунофлюоресценция (РНИФ, иммуноблот, вестерн-блот). Иммуноблот демонстрирует высокую чувствительность (99,3-99,7%) и специфичность (99,7%), но так как метод определяет иммунглобулины класса G, то с момента инфицирования результат может быть ложноотрицательным до трех недель.
Можно ли применять ПЦР РНК или ДНК ВИЧ для скрининга на ВИЧ?
Да, можно. Нет, не рекомендуется. Хотя за последнее десятилетие метод стал значительно дешевле и точнее, но все же он до сих пор и дорог, более длительный, и технически сложен, что предполагает большие риски ошибок. В России, так же впрочем, как и США, количественный метод ПЦР не рекомендован для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции в обычных случаях.
По поводу ПЦР — все же ПЦР способен выявлять вирус раньше всех других методов, он буквально может найти иглу в стоге сена т.к. метод способен идентифицировать от нескольких десятков МОЛЕКУЛ вирусной РНК или ДНК в миллилитре крови. ИФА на антиген способно показывать положительный сигнал только начиная от нескольких десятков миллионов молекул антигена р24 в миллилитре, но здесь нужно отметить, что число молекул р24 быстро нарастает до таких значений после инфицирования, и все же ПЦР работает всегда чуть раньше.
Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?
РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например для оценки эффективности терапии. ДНК — в мононуклеарных клетках, например для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА. И тот и другой тест могут быть и количественными и качественными. И тот и другой можно в узких случаях применить как диагностический, с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы.
Каким методом для диагностики ВИЧ работают в лаборатории МЦ «Андро-Мед»?
В лаборатории МЦ «Андро-Мед» для диагностики ВИЧ применяется метод ИФА, тесты 4-го поколения. Исследование крови на ВИЧ проводится сертифицированной стандартизированной иммуноферментной тест-системой «МилаЛаб-ИФА-ВИЧ-АГАТ» для выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24« , разрешенной к использованию на территории Российской Федерации, согласно Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ-инфекции» от 11.01.2011 года.
Участие лаборатории МЦ «Андро-Мед» во внешней оценки качество в разделе «ВИЧ-инфекция».
Обычным элементом деятельности лаборатории является постоянное участие во внешней оценки качества исследований, которое осуществляется Федеральной системе внешней оценки качества клинических лабораторных исследований (ФСВОК), созданной и функционирующей во исполнение приказов Минздрава России. Данное участие определено национальными стандартами и нормативными документами многих стран мира.
Разделы ФСВОК, в которых участвует лаборатория МЦ охватывают максимальное количество видов исследований, в том числе и раздел «ВИЧ-инфекция», что является одной из важнейших составляющих обеспечения правильности исследований и, соответственно, эффективности клинической лабораторной диагностики.
Лаборатория МЦ «Андро-Мед» имеет свидетельство об участии в Федеральной системе внешней оценки качества лабораторно-клинических исследований.
Будьте здоровы!! Берегите себя, своих любимых и близких!!!
цервикального канала
образование)
(мазок-отпечаток)
более образований)
соскобе)
albicans/glabrata/krusei)
(количественно)
соскобе)
(ФЕМОФЛОР 16)
(Андрофлор)
крови методом ПЦР, качественное исследование
крови методом ПЦР, качественное исследование
virus)
(качественно)
Аденовирусы группы F, Ротавирусы группы А, Норовирусы 2 генотипа, Астровирусы, Энтеровирус, —
Шигелла, Энтероинвазивные E. coli, Сальмонелла, Термофильные Кампилобактерии (кал)
Цитомегаловирус/ Вирус герпеса 6 типа) (качественно)
Цитомегаловирус/ Вирус герпеса 6 типа) (количественно)
репродуктивные проблемы) 12 показателей
крови
крови
крови
(АТ-ТПО) в крови
крови
сыворотке крови
в сыворотке крови
(бета-ХГЧ) в крови
гормоны (ССГ), в крови
ДГЭА-С (дегидроэпиандростерон-сульфат)
прогестерон) в крови
(Rubella virus) в крови
(Rubella virus) в крови
(Toxoplasma gondii) в крови
(Toxoplasma gondii) в крови
герпеса в крови
герпеса в крови
(Cytomegalovirus) в крови
(Cytomegalovirus) в крови
описторхоза (Opisthorchis felineus) в крови
токсокар
Salmonella typhi (РПГА)
CagA Helicobacter pilori
двуспиральной (нативной) ДНК
общего в крови
антиген)
антиген)
15-3 в крови (углеводный антиген рака молочной железы)
крови
крови
(Бета-2-гликопротеин, Суммарная фракция фосфолипидов, ХГЧ, Ревматоидный фактор, Двуспиральная ДНК,
Коллаген), полуколичественно
биоматериала)
биоматериала)
инсулин (натощак), расчет индекса HOMA-IR
клубочковой фильтрации) (кровь,моча)
(конъюгированного) в крови
крови
крови
крови
плотности (ЛПНП)
плотности в крови (ЛПВП)
(триглицериды)
коэффициент атерогенности)
крови(Креатинфосфокиназа КФК)
(Креатинфосфокиназа КФК -МВ)
ПТИ, МНО)
- En
- Ру
- Регистрация за рубежом
- Партнёрам
- Новости
- Фармаконадзор
- Претензии и рекламации
- En
- Ру
- О компании
- О Фармлэнд
- Качество
- Разработка
- Стратегия
- Партнерам
- Новости
- Вакансии
- Плазмазавод
- Продукция
- Поиск
Ещё - Пациентам
- Специалистам здравоохранения
- Контакты
-
- En
- Ру
- En
- Ру
-
ИФА-HIV 1,2 AGAT
ИФА-HIV 1,2 AGAT
Международное наименование
- Описание
- Инструкция
Назначение набора
Набор предназначен для одновременного выявления антител к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24 ВИЧ-1 в сыворотке и плазме крови человека “in vitro” методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа.
Характеристика и принцип работы набора
2.1 Состав набора:
|
Наименование компонента |
Количество |
|
Иммуносорбент |
2 планшета |
|
Положительный контрольный образец АТ (К+АТ) |
1 флакон, 3 мл |
|
Положительный контрольный образец АГ (К+АГ) |
3 флакона, лиофилизованный препарат |
|
Отрицательный контрольный образец (К–) |
2 флакона по 3 мл |
|
Раствор конъюгата №1 (РК-1) |
1 флакон, 12 мл |
|
Конъюгат №2 (Кг-2) |
1 флакон, 1 мл |
|
Раствор для разведения конъюгата №2 (РР-К2) |
2 флакона по 18 мл |
|
Буферный раствор для субстрата (БРС) |
2 флакона по 18 мл |
|
Хромоген ТМБ |
1 флакон, 1 мл |
|
Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25) |
2 флакона по 50 мл |
|
Стоп-реагент |
1 флакон, 12 мл |
|
Комплект ванночки для реагентов с наконечниками для многоканальных пипеток |
1 комплект |
|
Клейкая пленка |
6 штук |
2.2 Основные компоненты набора » ИФА-HIV 1,2 AGAT » – иммуносорбент, раствор конъюгата №1 и конъюгат №2.
Иммуносорбент представляет собой полистироловый планшет, в лунках которого сорбирована смесь рекомбинантных антигенов ВИЧ-1 (gp41) и ВИЧ-2 (gp36) и моноклональных антител к антигену р24 ВИЧ-1.
Раствор конъюгата №1 представляет собой смесь меченых биотином моноклональных человеческих антител против антигена р24 ВИЧ-1 и меченых биотином рекомбинантных белков ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
Конъюгат №2 представляет собой стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена.
Положительный контрольный образец АТ – сыворотка крови человека, содержащая антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не содержащая антитела к вирусу гепатита С и Treponema pallidum, антиген р24 ВИЧ-1 и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Положительный контрольный образец АГ – сыворотка крови человека содержащая нативный антиген р24 ВИЧ-1, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С и Treponema pallidum и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС, антиген р24 ВИЧ-1 и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета раствора конъюгата №1 и образцов сывороток инфицированной крови антиген р24 связывается как со специфическими антителами на твердой фазе, так и с моноклональными биотинилированными анти-р24 антителами, входящими в состав раствора конъюгата №1; ВИЧ-специфические антитела связываются как с рекомбинантными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2, сорбированными на твердой фазе, так и с антигенами, входящими в состав раствора конъюгата №1, образуя комплексы антиген-антитело. Иммунные комплексы анти-р24 специфических антител и антигена р24 выявляются конъюгатом №2. После отмывания несвязавшихся компонентов в лунки планшета добавляют раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена ТМБ.
Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты), и интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм.
Величина ОП прямо пропорциональна концентрации специфических антител и/или антигена р24 в образце сыворотки или плазмы. Чем выше содержание антител и/или антигена р24 в образце сыворотки, тем выше интенсивность окрашивания.
2.3 Набор рассчитан на проведение на проведение 24 постановок ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.
Меры предосторожности при работе с набором
3.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:
— работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;
— работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].
3.2 Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.
3.3 При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.
3.4 Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].
3.5 Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].
4.1 Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сывороток, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение (5-10) мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сывороток можно хранить при температуре (2-8) °С не более 5 сут. Замороженные образцы (желательно до температуры не менее минус 20 °С) можно хранить не более 1 года. Необходимо избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.
Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.
Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:
— не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;
— для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;
— всю используемую для приготовления реагентов посуду не обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;
— для работы с хромогеном ТМБ и РХ необходимо использовать отдельные емкости для растворов, наконечники для пипеток, посуду.
— необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;
— время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;
— при использовании промывателя следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;
— необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
— дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;
— для работы с исследуемыми и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником.
— при внесении в лунки РК-1 нельзя касаться наконечником пипетки поверхности планшета и раствора, находящегося в лунках.
— во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.
4.2 При вскрытии и растворении лиофилизованных компонентов необходимо следить, чтобы на крышке и стенках флаконов не оставалось сухого вещества.
Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа
5.1 Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм;
— полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);
— суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;
— пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,01 до 5,0 мл;
— пипетки 8-ми канальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,5 мл;
— мерный цилиндр вместимостью 2000 мл;
— колба лабораторная вместимостью 2000 мл;
— флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;
— ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);
— вата медицинская гигроскопическая;
— бумага фильтровальная;
— перчатки резиновые хирургические;
— раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;
— раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;
— вода деионизированная или дистиллированная;
— контейнер для сбора твердых отходов;
— контейнер для слива жидких отходов.
Подготовка к проведению анализа
6.1 Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин.
Все образцы сывороток (плазмы) и реагенты перед проведением анализа тщательно перемешать.
Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.
6.2 Приготовление раствора для промывания планшета
Внимание! Раствор для промывания планшета готовить за 15 мин до начала проведения анализа!
Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка. В мерный цилиндр вместимостью 2000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной воды до метки 1250 мл и аккуратно перемешать раствор. Раствор можно хранить при температуре (2-8) °С в течение 72 ч.
В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица А.1) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной воды и перемешать раствор. Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.3 Подготовка иммуносорбента
Иммуносорбент готов к использованию.
Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С в течение 3 месяцев.
6.4 Подготовка К+АТ, К–, РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагента
К+АТ, К–, РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.
Внимание! Во флаконе с РК-1 возможно выпадение осадка. Для проведения анализа необходимо использовать надосадочную жидкость.
Неиспользованные РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
Остаток К+АТ и К— после вскрытия флакона можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.5 Приготовление раствора К+АГ
Внимание! Раствор К+АГ готовить за 15 мин до начала проведения анализа!
Для восстановления лиофилизированного К+АГ перед вскрытием флакона легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флакона или пробки. Открыть флакон и положить пробку перевернутой на сухую поверхность. Внести во флакон 0,8 мл дистиллированной воды. Флакон закрыть пробкой, выдержать в течение 10 мин при температуре (18-25) °С и аккуратно наклоняя и вращая флакон, перемешать его содержимое до полного растворения, избегая образования пены.
Восстановленный К+АГ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение одного месяца, при температуре минус 20 °С – в течение шести месяцев. Допускается однократное замораживание-оттаивание восстановленного К+АГ.
6.6 Приготовление раствора Кг-2 в рабочем разведении
Из флакона с Кг-2 отобрать указанный в таблице А.1 объем и перенести во флакон с РР-К2. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К2, добавить Кг-2 в соответствии с таблицей А.1 и перемешать раствор, не допуская образования пены.
Внимание! Раствор Кг-2 в рабочем разведении готовят непосредственно перед использованием! Раствор Кг-2 в рабочем разведении можно хранить в течение 15 мин при температуре (18-25) °С. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!
Остаток Кг-2 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.7 Приготовление рабочего раствора субстрата
Флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения кристаллов.
Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 объем и перенести во флакон с БРС. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС, добавить хромогена ТМБ в соответствии с таблицей А.1 и перемешать раствор, не допуская образования пены.
Внимание! Рабочий раствор субстрата готовят непосредственно перед использованием в защищенном от света месте! Раствор можно хранить в течение 20 мин при температуре (18-25) °С в защищенном от света месте.
Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!
Остаток хромогена ТМБ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
Требования к промыванию планшета
7.1 Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;
— на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;
— необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок;
— необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;
— при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;
— некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.
8.1 В любые две лунки планшета внести по 0,07 мл (70 мкл) К+АТ, в две другие лунки– по 0,07 мл (70 мкл) К+АГ, в три другие лунки – по 0,07 мл (70 мкл) К–.
Внимание! При постановке ИФА на одном стрипе допускается использовать для К– — две лунки, для К+АТ – одну лунку, для К+АГ – одну лунку.
В остальные лунки планшета внести по 0,07 мл (70 мкл) исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека.
Внимание! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!
8.2 Во все лунки планшета поверх контрольных образцов и исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови сразу внести по 0,05 мл (50 мкл) РК-1. Содержимое лунок перемешать осторожным постукиванием по краям планшета.
8.3 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 60 мин.
Внимание! За (1-2) мин до окончания инкубации приготовить раствор Кг-2 в рабочем разведении (п 6.6).
8.4 Удалить содержимое лунок с помощью промывателя, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.2) семь раз.
8.5 Внести во все лунки планшета по 0,15 мл (150 мкл) раствора Кг-2 в рабочем разведении (п 6.6).
8.6 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 10 мин.
8.7 Удалить содержимое лунок планшета с помощью промывателя, затем промыть лунки планшетов раствором для промывания планшета (п 6.2) семь раз.
8.8 Во все лунки планшета внести по 0,15 мл (150 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.7).
При приготовлении рабочего раствора субстрата (п.6.7) флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов.
8.9 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в защищенном от света месте в течение 15 мин.
Внимание! По окончании инкубации в лунках с образцами сывороток, содержащими антитела к ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1, произойдет изменение окраски раствора от бесцветной до голубой различной интенсивности в зависимости от концентрации антител и/или антигена в исследуемом образце сыворотки.
8.10 Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.
Внимание! В лунках с образцами сывороток, содержащими антитела к ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1, произойдет изменение окраски раствора с голубой на желтую различной интенсивности.
8.11 Не позже чем через (1-2) мин после остановки реакции определить ОП в лунках в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.
Обработка результатов анализа
9.1 Рассчитать среднее значение ОП для лунок с К— – ОПср К—, ОЕ; для лунок с К+АТ – ОПср К+АТ, ОЕ; для лунок с К+АГ – ОПср К+АГ, ОЕ.
9.2 Результаты учитывать только в том случае если:
— значение ОПср К— не превышает 0,2 ОЕ;
— каждое отдельное значение ОП К— не должно отклоняться от ОПср К— более чем на 30%. Если одно из трех значений ОП К— выходит за этот предел, его следует исключить из расчета ОПср К—. Если два из трех значений ОП К— выходят за этот предел, анализ следует повторить на реагентах нового набора;
— значение ОПср К+АТ более 1,0 ОЕ;
— значение ОПср К+АГ более 1,0 ОЕ.
9.3 При соблюдении выше перечисленных условий вычислить критическое значение (ОПкрит.), ОЕ, по формуле (1):
ОПкрит. = ОПср К—+ 0,14 (1).
Результат теста считать положительным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека равно или больше значения ОПкрит.
Результат теста считать отрицательным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека меньше значения ОПкрит.
Аналитические и диагностические характеристики
Чувствительность набора реагентов ИФА-HIV 1,2 AGAT по выявлению антигена р24 ВИЧ-1 –
менее или равна 10 пг/мл.
Специфичность набора реагентов ИФА-HIV 1,2 AGAT – 100 % Стандарт АТ(-)ВИЧ. Стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов (ВИЧ-1,2) и антиген ВИЧ-1(р24).ОСО42-28-214-02П.Кат№INS-20. ЗАО «МБС».
11.1 Набор выпускается в пяти вариантах комплектации:
1 комплект 1Р – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы;
2 комплект 2М – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
3 комплект 2Р – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на 2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
4 комплект А2М – проведение анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
5 комплект А2Р – проведение анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на 2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.
Условия хранения и применения набора
12.1 Хранение набора должно производиться в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре (2-8)° С в течение всего срока годности. Запрещается замораживать компоненты набора.
12.2 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
12.3 Срок годности набора – 12 месяцев.
Таблица А.1 – Расход реагентов набора для постановки ИФА
|
Объем реагента, мл |
Количество используемых стрипов, шт. |
|||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
|
Приготовление раствора для промывания планшета |
||||||||||||
|
ФСБ-Т×25 |
4 |
8 |
12 |
16 |
20 |
24 |
28 |
32 |
36 |
40 |
44 |
50 |
|
Дистиллированная вода |
до 100 |
до 200 |
до 300 |
до 400 |
до 500 |
до 600 |
до 700 |
до 800 |
до 900 |
до 1000 |
до 1100 |
до 1250 |
|
Приготовление раствора Кг-2 в рабочем разведении |
||||||||||||
|
РР-К2 |
1,5 |
3,0 |
4,5 |
6,0 |
7,5 |
9,0 |
10,5 |
12,0 |
13,5 |
15,0 |
16,5 |
18,0 |
|
Кг-2 |
0,033 |
0,068 |
0,100 |
0,133 |
0,165 |
0,200 |
0,230 |
0,270 |
0,300 |
0,330 |
0,370 |
0,400 |
|
Приготовление рабочего раствора субстрата |
||||||||||||
|
БРС |
1,5 |
3,0 |
4,5 |
6,0 |
7,5 |
9,0 |
10,5 |
12,0 |
13,5 |
15,0 |
16,5 |
18,0 |
|
Хромоген ТМБ |
0,033 |
0,068 |
0,100 |
0,133 |
0,165 |
0,200 |
0,230 |
0,270 |
0,300 |
0,330 |
0,370 |
0,400 |
|
[1] |
Санитарные правила СП 17-69 РБ 98 «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 29.04.1998 № 18 |
|
[2] |
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351 О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД |
|
[3] |
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165 О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения |
|
[4] |
Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47 Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь |
|
[5] |
Санитарные нормы и правила СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами» |
СП ООО «Фармлэнд» Почтовый адрес: 220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Телфакс (017) 262-14-17.
По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».
Набор реагентов «МилаЛаб-ИФА-ВИЧ-АГАТ-ЭКСПРЕСС» Тест-система иммуноферментная для одновременного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24 ВИЧ-1, набор диагностический по ТУ 9398-227-05941003-2013
— иммуносорбент;
— конъюгат-1, готовый к применению;
— конъюгат-2, готовый к применению;
— К+АГ — контрольный положительный образец антигена р24 ВИЧ-1;
— К+АТ — контрольный положительный образец антител;
— К- — контрольный отрицательный образец;
— ПР (концентрат х 25) — промывочный раствор;
— стоп-реагент;
— ТМБ — Субстратный раствор, готовый к применению (при комплектации набора
ТМБ-Субстратным раствором);
или
— СБ — субстратный буферный раствор и
— ТМБ — хромоген 3,3ꞌ , 5,5ꞌ — тетраметилбензидин (концентрат×11).
Купить Набор реагентов «МилаЛаб-ИФА-ВИЧ-АГАТ-ЭКСПРЕСС» Тест-система иммуноферментная для одновременного выявления антител к вирусам иммунодефицита человека 1 и 2 типов (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) и антигена р24 ВИЧ-1, набор диагностический по ТУ 9398-227-05941003-2013, лучшая цена, доставка по России. Для заказа у нас на сайте вы можете заполнить заявку в свободной форме на почту Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript. или же воспользоваться формой заказа на сайте.
Характеристика и принцип работы набора
2.1 Состав набора:
|
Наименование компонента |
Количество |
|
Иммуносорбент |
2 планшета |
|
Положительный контрольный образец АТ (К+АТ) |
1 флакон, 3 мл |
|
Положительный контрольный образец АГ (К+АГ) |
3 флакона, лиофилизованный препарат |
|
Отрицательный контрольный образец (К–) |
2 флакона по 3 мл |
|
Раствор конъюгата №1 (РК-1) |
1 флакон, 12 мл |
|
Конъюгат №2 (Кг-2) |
1 флакон, 1 мл |
|
Раствор для разведения конъюгата №2 (РР-К2) |
2 флакона по 18 мл |
|
Буферный раствор для субстрата (БРС) |
2 флакона по 18 мл |
|
Хромоген ТМБ |
1 флакон, 1 мл |
|
Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т×25) |
2 флакона по 50 мл |
|
Стоп-реагент |
1 флакон, 12 мл |
|
Комплект ванночки для реагентов с наконечниками для многоканальных пипеток |
1 комплект |
|
Клейкая пленка |
6 штук |
2.2 Основные компоненты набора » ИФА-HIV 1,2 AGAT » – иммуносорбент, раствор конъюгата №1 и конъюгат №2.
Иммуносорбент представляет собой полистироловый планшет, в лунках которого сорбирована смесь рекомбинантных антигенов ВИЧ-1 (gp41) и ВИЧ-2 (gp36) и моноклональных антител к антигену р24 ВИЧ-1.
Раствор конъюгата №1 представляет собой смесь меченых биотином моноклональных человеческих антител против антигена р24 ВИЧ-1 и меченых биотином рекомбинантных белков ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
Конъюгат №2 представляет собой стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена.
Положительный контрольный образец АТ – сыворотка крови человека, содержащая антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не содержащая антитела к вирусу гепатита С и Treponema pallidum, антиген р24 ВИЧ-1 и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Положительный контрольный образец АГ – сыворотка крови человека содержащая нативный антиген р24 ВИЧ-1, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, вирусу гепатита С и Treponema pallidum и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Отрицательный контрольный образец – сыворотка крови человека, не содержащая антитела к ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВГС, антиген р24 ВИЧ-1 и НВs-антиген, инактивированная прогреванием в течение 3 ч при температуре 56 ºC.
Принцип работы набора. При внесении в лунки планшета раствора конъюгата №1 и образцов сывороток инфицированной крови антиген р24 связывается как со специфическими антителами на твердой фазе, так и с моноклональными биотинилированными анти-р24 антителами, входящими в состав раствора конъюгата №1; ВИЧ-специфические антитела связываются как с рекомбинантными антигенами ВИЧ-1 и ВИЧ-2, сорбированными на твердой фазе, так и с антигенами, входящими в состав раствора конъюгата №1, образуя комплексы антиген-антитело. Иммунные комплексы анти-р24 специфических антител и антигена р24 выявляются конъюгатом №2. После отмывания несвязавшихся компонентов в лунки планшета добавляют раствор субстрата пероксидазы (перекись водорода) и хромогена ТМБ.
Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент (0,9 М раствор серной кислоты), и интенсивность окрашивания раствора в лунках измеряют на спектрофотометре как величину оптической плотности (ОП) при длине волны 450 нм.
Величина ОП прямо пропорциональна концентрации специфических антител и/или антигена р24 в образце сыворотки или плазмы. Чем выше содержание антител и/или антигена р24 в образце сыворотки, тем выше интенсивность окрашивания.
2.3 Набор рассчитан на проведение на проведение 24 постановок ИФА: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.
Меры предосторожности при работе с набором
3.1 Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. Однако работа со всеми исследуемыми образцами сыворотки (плазмы) крови человека, которые следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции, с отработанными растворами и жидкостями, различным оборудованием, которое может быть загрязнено в процессе анализа, требует определенных мер безопасности при использовании набора:
— работу необходимо проводить в специально оборудованном помещении;
— работать необходимо с применением средств индивидуальной защиты и с соблюдением мер предосторожности в соответствии с требованиями [1], [2], и [3].
3.2 Стоп-реагент, содержащий серную кислоту, обладает раздражающим действием. При попадании на кожу и слизистые немедленно промыть большим количеством воды.
3.3 При работе с набором рабочие места должны быть обеспечены приточно-вытяжной вентиляцией.
3.4 Все лица, работающие в лаборатории с наборами, должны проходить обязательный медицинский осмотр в соответствии с требованиями [4].
3.5 Утилизация медицинских отходов и/или неиспользованных наборов с истекшим сроком годности должна производиться в соответствии с требованиями [5].
4.1 Для исключения ложных результатов исследуемые образцы необходимо готовить и хранить в условиях, предотвращающих бактериальный пророст. Необходимо осветлять образцы сывороток, содержащие агрегированные компоненты сыворотки или осадок, при помощи центрифугирования в течение (5-10) мин при скорости вращения 3000 об/мин. Образцы сывороток можно хранить при температуре (2-8) °С не более 5 сут. Замороженные образцы (желательно до температуры не менее минус 20 °С) можно хранить не более 1 года. Необходимо избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.
Необходимо помнить, что образцы с гемолизом, гиперлипидемией, бактериальным проростом, а также длительно хранившиеся без замораживания не пригодны для анализа.
Надежность результатов зависит от выполнения следующих правил:
— не допускается использование набора после окончания срока годности, а также смешивание компонентов наборов разных серий;
— для приготовления каждого реагента должна использоваться отдельная емкость;
— всю используемую для приготовления реагентов посуду не обрабатывать дезрастворами и моющими средствами. В случае необходимости промыть водой питьевой проточной, а затем пять раз ополоснуть дистиллированной водой;
— для работы с хромогеном ТМБ и РХ необходимо использовать отдельные емкости для растворов, наконечники для пипеток, посуду.
— необходимо обратить внимание на тщательное перемешивание реагентов;
— время между заполнением и опорожнением лунок планшета растворами и реагентами должно быть не менее 30 с. Не допускается подсыхание лунок на всех этапах постановки ИФА;
— при использовании промывателя следить за состоянием емкости для раствора для промывания планшета и соединительных шлангов: в них не должно быть признаков бактериального или грибкового роста;
— необходимо использовать пипетки автоматические со сменными наконечниками, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов пипетирования (погрешность не более 3 %);
— дозаторы и рабочие поверхности обрабатывать раствором с объемной долей спирта этилового 70 %. Не использовать хлорамин и другие хлорсодержащие вещества;
— для работы с исследуемыми и контрольными образцами рекомендуется использовать одноразовые наконечники для пипеток. Каждый образец сыворотки, а также реагенты набора необходимо отбирать отдельным наконечником.
— при внесении в лунки РК-1 нельзя касаться наконечником пипетки поверхности планшета и раствора, находящегося в лунках.
— во время проведения анализа следует избегать попадания прямых солнечных лучей на рабочую поверхность.
4.2 При вскрытии и растворении лиофилизованных компонентов необходимо следить, чтобы на крышке и стенках флаконов не оставалось сухого вещества.
Оборудование и материалы, необходимые для проведения анализа
5.1 Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий проводить измерения оптической плотности растворов в лунках планшета при длине волны 450 нм;
— полу- или автоматическое устройство для промывания планшетов (вошер);
— суховоздушный термостат типа ТС-80 М2, поддерживающий температуру (37±1) °С, или аналогичный ему по характеристикам;
— пипетки одноканальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,01 до 5,0 мл;
— пипетки 8-ми канальные автоматические со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости до 0,5 мл;
— мерный цилиндр вместимостью 2000 мл;
— колба лабораторная вместимостью 2000 мл;
— флаконы стеклянные вместимостью 20 мл;
— ванночки для реагентов или чашки Петри (диаметр 100 мм);
— вата медицинская гигроскопическая;
— бумага фильтровальная;
— перчатки резиновые хирургические;
— раствор с объемной долей этилового спирта 70 %;
— раствор с массовой долей перекиси водорода 6 %;
— вода деионизированная или дистиллированная;
— контейнер для сбора твердых отходов;
— контейнер для слива жидких отходов.
Подготовка к проведению анализа
6.1 Набор реагентов перед проведением анализа извлечь из холодильника, открыть крышку коробки и выдержать компоненты набора при температуре (18-25) °С в течение 30 мин.
Все образцы сывороток (плазмы) и реагенты перед проведением анализа тщательно перемешать.
Расход реагентов набора для постановки анализа, который определяется количеством используемых стрипов, приведен в таблице А.1 Приложения А.
6.2 Приготовление раствора для промывания планшета
Внимание! Раствор для промывания планшета готовить за 15 мин до начала проведения анализа!
Если флакон с ФСБ-Т×25 содержит осадок, его необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения осадка. В мерный цилиндр вместимостью 2000 мл внести содержимое флакона с ФСБ-Т×25, затем добавить дистиллированной воды до метки 1250 мл и аккуратно перемешать раствор. Раствор можно хранить при температуре (2-8) °С в течение 72 ч.
В случае использования одного или несколько стрипов содержимое флакона с ФСБ-Т×25 интенсивно встряхнуть в течение (20-30) с, отобрать необходимый объем раствора (таблица А.1) в мерный стакан или цилиндр, добавить необходимое количество дистиллированной воды и перемешать раствор. Неиспользованный ФСБ-Т×25 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.3 Подготовка иммуносорбента
Иммуносорбент готов к использованию.
Открыть пакет и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре (2-8) °С в течение 3 месяцев.
6.4 Подготовка К+АТ, К–, РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагента
К+АТ, К–, РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагент готовы к использованию.
Внимание! Во флаконе с РК-1 возможно выпадение осадка. Для проведения анализа необходимо использовать надосадочную жидкость.
Неиспользованные РК-1, РР-К2, БРС и стоп-реагент после вскрытия флаконов можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
Остаток К+АТ и К— после вскрытия флакона можно хранить в закрытых флаконах при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.5 Приготовление раствора К+АГ
Внимание! Раствор К+АГ готовить за 15 мин до начала проведения анализа!
Для восстановления лиофилизированного К+АГ перед вскрытием флакона легким постукиванием стряхнуть частицы, прилипшие к стенкам флакона или пробки. Открыть флакон и положить пробку перевернутой на сухую поверхность. Внести во флакон 0,8 мл дистиллированной воды. Флакон закрыть пробкой, выдержать в течение 10 мин при температуре (18-25) °С и аккуратно наклоняя и вращая флакон, перемешать его содержимое до полного растворения, избегая образования пены.
Восстановленный К+АГ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение одного месяца, при температуре минус 20 °С – в течение шести месяцев. Допускается однократное замораживание-оттаивание восстановленного К+АГ.
6.6 Приготовление раствора Кг-2 в рабочем разведении
Из флакона с Кг-2 отобрать указанный в таблице А.1 объем и перенести во флакон с РР-К2. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество РР-К2, добавить Кг-2 в соответствии с таблицей А.1 и перемешать раствор, не допуская образования пены.
Внимание! Раствор Кг-2 в рабочем разведении готовят непосредственно перед использованием! Раствор Кг-2 в рабочем разведении можно хранить в течение 15 мин при температуре (18-25) °С. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!
Остаток Кг-2 можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
6.7 Приготовление рабочего раствора субстрата
Флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием при температуре (37±1) °С до полного растворения кристаллов.
Из флакона с хромогеном ТМБ отобрать указанный в таблице А.1 объем и перенести во флакон с БРС. Содержимое флакона тщательно перемешать, не допуская образования пены.
В случае использования одного или несколько стрипов в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС, добавить хромогена ТМБ в соответствии с таблицей А.1 и перемешать раствор, не допуская образования пены.
Внимание! Рабочий раствор субстрата готовят непосредственно перед использованием в защищенном от света месте! Раствор можно хранить в течение 20 мин при температуре (18-25) °С в защищенном от света месте.
Раствор необходимо предохранять от попадания света и контакта с металлами или ионами металлов. Перед использованием раствор субстрата должен быть бесцветным. Посуду, которая будет в ходе реакции контактировать с раствором субстрата, отмывать без применения синтетических моющих средств. Использовать только новую ванночку для реагентов и новые наконечники!
Остаток хромогена ТМБ можно хранить в закрытом флаконе при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора.
Требования к промыванию планшета
7.1 Для промывания планшета рекомендуется использовать автоматический или полуавтоматический промыватель – вошер; в случае отсутствия вошера можно промывать лунки 8-канальной пипеткой;
— на всех этапах промывания необходимо контролировать заполнение всех лунок и полное удаление (аспирацию) жидкости из них;
— необходимо при каждом промывании все лунки заполнить раствором до краев (0,30-0,35 мл в лунку), без переполнения и перетекания жидкости из соседних лунок;
— необходимо выдерживать лунки, заполненными раствором для промывания планшета, в течение 30 с;
— при каждой аспирации тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамкой со стрипами в перевернутом положении по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге, положенной на лист полиэтилена;
— некачественное промывание планшета приводит к получению некорректных результатов.
8.1 В любые две лунки планшета внести по 0,07 мл (70 мкл) К+АТ, в две другие лунки– по 0,07 мл (70 мкл) К+АГ, в три другие лунки – по 0,07 мл (70 мкл) К–.
Внимание! При постановке ИФА на одном стрипе допускается использовать для К– — две лунки, для К+АТ – одну лунку, для К+АГ – одну лунку.
В остальные лунки планшета внести по 0,07 мл (70 мкл) исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови человека.
Внимание! Каждый образец необходимо отбирать одноразовым наконечником!
8.2 Во все лунки планшета поверх контрольных образцов и исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови сразу внести по 0,05 мл (50 мкл) РК-1. Содержимое лунок перемешать осторожным постукиванием по краям планшета.
8.3 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 60 мин.
Внимание! За (1-2) мин до окончания инкубации приготовить раствор Кг-2 в рабочем разведении (п 6.6).
8.4 Удалить содержимое лунок с помощью промывателя, затем промыть лунки планшета раствором для промывания планшета (п 6.2) семь раз.
8.5 Внести во все лунки планшета по 0,15 мл (150 мкл) раствора Кг-2 в рабочем разведении (п 6.6).
8.6 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в течение 10 мин.
8.7 Удалить содержимое лунок планшета с помощью промывателя, затем промыть лунки планшетов раствором для промывания планшета (п 6.2) семь раз.
8.8 Во все лунки планшета внести по 0,15 мл (150 мкл) рабочего раствора субстрата (п 6.7).
При приготовлении рабочего раствора субстрата (п.6.7) флакон с хромогеном ТМБ необходимо прогреть перед использованием в течение (3-5) мин при температуре (37±1)° С до полного растворения кристаллов.
8.9 Планшет заклеить пленкой или закрыть крышкой и инкубировать в термостате при температуре (37±1) °С в защищенном от света месте в течение 15 мин.
Внимание! По окончании инкубации в лунках с образцами сывороток, содержащими антитела к ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1, произойдет изменение окраски раствора от бесцветной до голубой различной интенсивности в зависимости от концентрации антител и/или антигена в исследуемом образце сыворотки.
8.10 Остановить пероксидазную реакцию путем внесения во все лунки по 0,05 мл (50 мкл) стоп-реагента.
Внимание! В лунках с образцами сывороток, содержащими антитела к ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2, и/или антиген р24 ВИЧ-1, произойдет изменение окраски раствора с голубой на желтую различной интенсивности.
8.11 Не позже чем через (1-2) мин после остановки реакции определить ОП в лунках в одноволновом режиме при длине волны 450 нм.
Обработка результатов анализа
9.1 Рассчитать среднее значение ОП для лунок с К— – ОПср К—, ОЕ; для лунок с К+АТ – ОПср К+АТ, ОЕ; для лунок с К+АГ – ОПср К+АГ, ОЕ.
9.2 Результаты учитывать только в том случае если:
— значение ОПср К— не превышает 0,2 ОЕ;
— каждое отдельное значение ОП К— не должно отклоняться от ОПср К— более чем на 30%. Если одно из трех значений ОП К— выходит за этот предел, его следует исключить из расчета ОПср К—. Если два из трех значений ОП К— выходят за этот предел, анализ следует повторить на реагентах нового набора;
— значение ОПср К+АТ более 1,0 ОЕ;
— значение ОПср К+АГ более 1,0 ОЕ.
9.3 При соблюдении выше перечисленных условий вычислить критическое значение (ОПкрит.), ОЕ, по формуле (1):
ОПкрит. = ОПср К—+ 0,14 (1).
Результат теста считать положительным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека равно или больше значения ОПкрит.
Результат теста считать отрицательным при анализе на данном наборе реагентов, если значение ОП исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови человека меньше значения ОПкрит.
Аналитические и диагностические характеристики
Чувствительность набора реагентов ИФА-HIV 1,2 AGAT по выявлению антигена р24 ВИЧ-1 –
менее или равна 10 пг/мл.
Специфичность набора реагентов ИФА-HIV 1,2 AGAT – 100 % Стандарт АТ(-)ВИЧ. Стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека первого и второго типов (ВИЧ-1,2) и антиген ВИЧ-1(р24).ОСО42-28-214-02П.Кат№INS-20. ЗАО «МБС».
11.1 Набор выпускается в пяти вариантах комплектации:
1 комплект 1Р – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 12 постановок ИФА на разборном планшете: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 96 определений, включая контрольные образцы;
2 комплект 2М – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
3 комплект 2Р – проведение анализа ручным способом. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на 2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
4 комплект А2М – проведение анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 2 постановок ИФА на монолитных планшетах: 1 постановка – 1 планшет. Всего – 192 определений, включая контрольные образцы;
5 комплект А2Р – проведение анализа на автоматическом анализаторе. Набор рассчитан на проведение 24 постановок ИФА на 2 разборных планшетах: 1 постановка – 1 стрип (8 лунок). Всего – 192 определений, включая контрольные образцы.
Условия хранения и применения набора
12.1 Хранение набора должно производиться в чистом, защищенном от влаги и света помещении при температуре (2-8)° С в течение всего срока годности. Запрещается замораживать компоненты набора.
12.2 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
12.3 Срок годности набора – 12 месяцев.
Таблица А.1 – Расход реагентов набора для постановки ИФА
|
Объем реагента, мл |
Количество используемых стрипов, шт. |
|||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
|
Приготовление раствора для промывания планшета |
||||||||||||
|
ФСБ-Т×25 |
4 |
8 |
12 |
16 |
20 |
24 |
28 |
32 |
36 |
40 |
44 |
50 |
|
Дистиллированная вода |
до 100 |
до 200 |
до 300 |
до 400 |
до 500 |
до 600 |
до 700 |
до 800 |
до 900 |
до 1000 |
до 1100 |
до 1250 |
|
Приготовление раствора Кг-2 в рабочем разведении |
||||||||||||
|
РР-К2 |
1,5 |
3,0 |
4,5 |
6,0 |
7,5 |
9,0 |
10,5 |
12,0 |
13,5 |
15,0 |
16,5 |
18,0 |
|
Кг-2 |
0,033 |
0,068 |
0,100 |
0,133 |
0,165 |
0,200 |
0,230 |
0,270 |
0,300 |
0,330 |
0,370 |
0,400 |
|
Приготовление рабочего раствора субстрата |
||||||||||||
|
БРС |
1,5 |
3,0 |
4,5 |
6,0 |
7,5 |
9,0 |
10,5 |
12,0 |
13,5 |
15,0 |
16,5 |
18,0 |
|
Хромоген ТМБ |
0,033 |
0,068 |
0,100 |
0,133 |
0,165 |
0,200 |
0,230 |
0,270 |
0,300 |
0,330 |
0,370 |
0,400 |
|
[1] |
Санитарные правила СП 17-69 РБ 98 «Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 29.04.1998 № 18 |
|
[2] |
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 16.12.1998 г. № 351 О пересмотре ведомственных нормативных актов, регламентирующих вопросы по проблеме ВИЧ/СПИД |
|
[3] |
Приказ Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 25.11.2002 г. № 165 О проведении дезинфекции и стерилизации учреждениями здравоохранения |
|
[4] |
Постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 28.04.2010 г. № 47 Об утверждении Инструкции о порядке проведения обязательных медицинских осмотров работающих и признании утратившими силу некоторых постановлений Министерства здравоохранения Республики Беларусь |
|
[5] |
Санитарные нормы и правила СанПиН № 2.1.7.14-20-2005 «Правила обращения с медицинскими отходами» |
СП ООО «Фармлэнд» Почтовый адрес: 220113 г. Минск, ул. Восточная, 129. Телфакс (017) 262-14-17.
По вопросам применения и качества набора обращаться на предприятие-изготовитель СП ООО «Фармлэнд».