Стандартные эритроциты для определения групп крови инструкция

Галерея 1

Галерея 2

Инструкция

По изготовлению консервированных стандартных

Эритроцитов и их применению в

Изосерологических исследованиях

Стандартные эритроциты,
содержащие определенные сочетания
аллоантигенов, предназначены для
выявления антиэритроцитарных антител
в сыворотке исследуемой крови, при
определении групп крови АВО перекрестным
способом, при определении резус-принадлежности
крови, а также для проведения контроля
специфичности и активности стандартных
изогемагглютинирующих сывороток АВО,
сывороток антирезус; тест-сывороток и
реактивов, предназначенных для определения
антигенов различных систем эритроцитов
крови человека. Стандартные эритроциты
группы О(I) должны содержать в эритроцитах
клинически значимые антигены: D, C, Cw, c,
E, e, K, k, Fy, Jk, M, N, S, s, Le.

С целью увеличения
срока годности стандартных эритроцитов
можно производить их консервирование
специально изготовленными консервирующими
растворами.

I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам

Стандартные эритроциты
для исследований по системе АВО должны
давать четкую, хорошо видимую агглютинацию
при взаимодействии со стандартными
сыворотками соответствующей специфичности
и не давать агглютинации с сыворотками,
не содержащими антител против данного
антигена эритроцитов.

Стандартные эритроциты
группы А(II), предназначенные для выявления
агглютинина анти-А, должны иметь титр
не ниже 1:64, эритроциты группы В(III),
предназначенные для выявления агглютинина
анти-В, также должны иметь титр не ниже
1:64.

Титр антигенов А и В
устанавливается с помощью стандартных
изогемагглютинирующих сывороток группы
Абета(II) (анти-В) и Вальфа(III) (анти-А) или
соответствующих моноклональных антител,
удовлетворяющих требованиям действующих
инструкций.

Время наступления
агглютинации эритроцитов А1 и В со
стандартными изогемагглютинирующими
реактивами должно составлять не более
десяти секунд; эритроцитов подгруппы
А3, В2 — не более двух минут.

Стандартные эритроциты
группы крови О(I) не должны давать
агглютинации со стандартными сыворотками
групп крови Оальфа бета(I), Абета(II),
Вальфа(III) в течение двадцати минут.

Стандартные
резус-положительные эритроциты группы
крови О(I), содержащие антиген D, а также
антигены С, Cw, c и E, e в различных сочетаниях,
предназначенные для выявления антител
системы резус, должны давать соответственно
со стандартными сыворотками анти-D,
анти-C, анти-Cw, анти-c, анти-E и анти-e четкую
агглютинацию при определении методом
конглютинации с желатином, экспресс-методом
в пробирках или на плоскости без подогрева
или непрямой пробе Кумбса в зависимости
от того, для какого метода исследования
предназначена данная стандартная
сыворотка антирезус.

Стандартные
резус-отрицательные эритроциты О(I)
фенотипа ccddee не должны давать агглютинации
с реактивами антирезус, содержащими
антитела анти-D, анти-С, анти-Е во всех
методах исследования, для использования
в которых предназначены указанные
реактивы антирезус.

Время наблюдения за
отрицательной реакцией должно
соответствовать времени, установленному
для каждой из этих реакций.

II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов

Приготовление стандартных
эритроцитов производится в условиях
строгого соблюдения асептики и состоит
из изготовления консервирующего
раствора, получения взвеси эритроцитов
в консервирующем растворе, розлива
эритроцитов, маркировки продукции и
контрольных исследований.

1. Изготовление
консервирующего раствора для стандартных
эритроцитов.

Консервирующей средой
для приготовления стандартных эритроцитов
могут служить растворы следующего
состава:

Консервант N 1:

сорбит
40,0 г

глюкоза
6,0 г

Na2HPO4x12H20
2,0 г

KH2PO4
0,9 г

левомицетин
0,06 г

этиловый спирт
96 град. 100 мл

вода бидистиллированная
до 1000 мл

рН раствора
6,8-6,9

В случае необходимости
доведения рН до требуемой величины
добавляется несколько кристаллов
аскорбиновой кислоты или Na2HPO4x12H20.

Консервант N 2:

аденин
0,03 г

инозин
0,06 г

лимонная кислота
1,5 г

глюкоза
3,0 г

Na3PO4
0,4 г

NaOH 1н
20 мл

вода дистиллированная
до 100 мл

рН раствора
6,3-6,4

Консервирующие растворы
(консерванты) представляют собой
прозрачную бесцветную жидкость без
запаха. Стерилизация консервантов
производится путем фильтрования их
через соответствующие стерилизующие
фильтры. Розлив производят в стерильные
флаконы емкостью 250 мл или 500 мл, которые
немедленно закрывают резиновыми пробками
и завальцовывают металлическими
колпачками. Срок годности консервантов
— шесть месяцев. В случае помутнения
консервирующего раствора или появления
желтого окрашивания применение его для
работы недопустимо.

Каждому человеку полезно запомнить свою группу крови. Это может неожиданно пригодиться при чрезвычайных ситуациях. Не зря у военнослужащих отмечается группа крови на гимнастерке или жетонах. Проблемы с тем, как определить группу крови, не существует. В крупных лечебных учреждениях этим занимаются лаборатории. Но даже в небольших сельских амбулаториях имеются стандартные наборы для определения группы, а провести анализ умеют все врачи и средние медицинские работники. Самостоятельно делать это ни к чему, когда есть специалисты.

Какая группа крови у ребенка можно предположить по родителям. Например, зная, что у родителей вторая, третья или четвертая, не стоит надеяться, что у ребенка будет первая.

Советы для домашнего определения

Подобные советы дают люди, которые «живут» в интернете и собирают любую информацию без разбора. Порой переиначивают ее на свой лад.

Действительно, имеется теория питания в зависимости от типа крови и проведены попытки связать с ней характер личности. Но это разрабатывалось для подбора наиболее подходящего рациона, предотвращения болезней. О связи типа личности с номером крови даже психологи перестали говорить.

Тем более, нельзя судить по любимым блюдам или наклонности к лидерству о своей группе.

В домашних условиях что-либо узнать лучше из полноценных статей, консультаций специалистов. Возможно, имеются медицинские документы (амбулаторная карта, выписки из стационара), в которых есть сведения о вашей крови.

По желанию доноров и пациентов стационаров в паспорт можно проставить печать с указанием этих сведений.

Подобные нашивки применяются на армейской форме

Кто придумал группы крови

Первооткрывателем четырех групп крови является австрийский ученый и врач К. Ландштейнер, получивший за это Нобелевскую премию по медицине в 1930 году. Открытие позволило предотвратить смертельные исходы по причине переливания, изучать предварительно совместимость донорских признаков и реципиента.

Суть предложенной системы АВ0 заключается в наличии у человека и животных антигенных структур на эритроцитах. Типовых антител (гаммаглобулинов) к ним в плазме не имеется. Поэтому реакцию «антиген + антитело» можно использовать для определения.

Распространенность групп крови по национальному признаку

Склеивание эритроцитов происходит во время встречи антигена со своим антителом. Такая реакция называется гемагглютинацией. Она видна при проведении анализа в виде мелких хлопьев. Определение группы крови основывается на получении картины агглютинации с типовыми сыворотками.

Антигены эритроцитов типа «А» связываются с антителами «ά», соответственно «В» с «β». По составу крови выделены:

• I, или 0 (ά, β) — на поверхности эритроцитов совсем нет антигенов;
• II, или А (β) — содержат антиген А с антителом β;
• III, или В (ά) — имеется антиген типа В с антителом ά;
• IV, или АВ(00) — имеет оба антигена, но не содержит антител.

Антигены имеются у зародыша человека уже в эмбриональном периоде, а антитела (агглютинины) появляются в сыворотке новорожденных в течение первого месяца жизни.

Стандартное определение группы крови (простой метод)

Для проведения анализа на группу крови нужны эритроциты пациента (берутся из капли крови) и стандартные сыворотки, содержащие известные антигены.

Сыворотки изготавливаются из донорской крови на «Станциях переливания», имеют сроки годности, требуют соблюдения условий хранения. На ампулах указывается номер серии. Для точного анализа берется два набора сывороток разных серий. Это делается с целью исключения ошибок.

На плоской тарелке двумя рядами помещают по крупной капле четырех сывороток (достаточно только III и II, но для контроля берется еще 1 и 1V). Разными стеклянными палочками (удобно пользоваться глазными пипетками) в капли сывороток вносят исследуемую кровь (соотношение должно получиться примерно 1:10) и осторожно помешивают.

Пять минут тарелку покачивают, давая возможность сывороткам хорошо перемешаться с кровью.

Расшифровка результатов

Проходит 5 минут, и можно оценивать результаты анализа. В больших каплях сыворотки наступает просветление, в одних образуются мелкие хлопья (реакция агглютинации), в других их нет. Здесь возможны варианты:

• если агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками III и II групп (+ контрольные 1 и 1V) — это первая группа;
• если свертывание отмечается во всех, кроме II — это указывает на вторую группу;
• при отсутствии агглютинации только с III сывороткой — устанавливается третья группа крови;
• если свертываемость отмечается во всех пробах, включая 1V-контрольную — группа четвертая.

Когда сыворотки расположены в правильном порядке, на тарелке проставлены подписи, то ориентироваться легко: где нет агглютинации, такая и группа.

Бывают случаи, когда склеивание видно неясно. Тогда анализ переделывают, мелкую агглютинацию смотрят под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Для уточнения группы при невыраженной агглютинации применяют метод двойной перекрестной реакции со стандартными эритроцитами. В данном случае известными являются не сыворотки, как в простом методе, а эритроциты. У пациента кровь набирают в пробирку, центрифугируют и для исследования пипеткой откачивают сверху сыворотку.

Подобные нашивки применяются на армейской форме

Кто придумал группы крови

Первооткрывателем четырех групп крови является австрийский ученый и врач К. Ландштейнер, получивший за это Нобелевскую премию по медицине в 1930 году. Открытие позволило предотвратить смертельные исходы по причине переливания, изучать предварительно совместимость донорских признаков и реципиента.

Суть предложенной системы АВ0 заключается в наличии у человека и животных антигенных структур на эритроцитах. Типовых антител (гаммаглобулинов) к ним в плазме не имеется. Поэтому реакцию «антиген + антитело» можно использовать для определения.

Распространенность групп крови по национальному признаку

Склеивание эритроцитов происходит во время встречи антигена со своим антителом. Такая реакция называется гемагглютинацией. Она видна при проведении анализа в виде мелких хлопьев. Определение группы крови основывается на получении картины агглютинации с типовыми сыворотками.

Антигены эритроцитов типа «А» связываются с антителами «ά», соответственно «В» с «β». По составу крови выделены:

• I, или 0 (ά, β) — на поверхности эритроцитов совсем нет антигенов;
• II, или А (β) — содержат антиген А с антителом β;
• III, или В (ά) — имеется антиген типа В с антителом ά;
• IV, или АВ(00) — имеет оба антигена, но не содержит антител.

Антигены имеются у зародыша человека уже в эмбриональном периоде, а антитела (агглютинины) появляются в сыворотке новорожденных в течение первого месяца жизни.

Стандартное определение группы крови (простой метод)

Для проведения анализа на группу крови нужны эритроциты пациента (берутся из капли крови) и стандартные сыворотки, содержащие известные антигены.

Сыворотки изготавливаются из донорской крови на «Станциях переливания», имеют сроки годности, требуют соблюдения условий хранения. На ампулах указывается номер серии. Для точного анализа берется два набора сывороток разных серий. Это делается с целью исключения ошибок.

На плоской тарелке двумя рядами помещают по крупной капле четырех сывороток (достаточно только III и II, но для контроля берется еще 1 и 1V). Разными стеклянными палочками (удобно пользоваться глазными пипетками) в капли сывороток вносят исследуемую кровь (соотношение должно получиться примерно 1:10) и осторожно помешивают.

Пять минут тарелку покачивают, давая возможность сывороткам хорошо перемешаться с кровью.

Расшифровка результатов

Проходит 5 минут, и можно оценивать результаты анализа. В больших каплях сыворотки наступает просветление, в одних образуются мелкие хлопья (реакция агглютинации), в других их нет. Здесь возможны варианты:

• если агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками III и II групп (+ контрольные 1 и 1V) — это первая группа;
• если свертывание отмечается во всех, кроме II — это указывает на вторую группу;
• при отсутствии агглютинации только с III сывороткой — устанавливается третья группа крови;
• если свертываемость отмечается во всех пробах, включая 1V-контрольную — группа четвертая.

Когда сыворотки расположены в правильном порядке, на тарелке проставлены подписи, то ориентироваться легко: где нет агглютинации, такая и группа.

Бывают случаи, когда склеивание видно неясно. Тогда анализ переделывают, мелкую агглютинацию смотрят под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Для уточнения группы при невыраженной агглютинации применяют метод двойной перекрестной реакции со стандартными эритроцитами. В данном случае известными являются не сыворотки, как в простом методе, а эритроциты. У пациента кровь набирают в пробирку, центрифугируют и для исследования пипеткой откачивают сверху сыворотку.

Стандартные антисыворотки

На плоскую белую тарелку капают 2 большие капли сыворотки от пациента. В них добавляются стандартные эритроциты А (II) и В (III) групп крови. Постепенно размешивают, покачивают тарелку.

Результат оценивается через 5 минут:

• если агглютинация наступила в обеих каплях, группа первая;
• если нет ни в одной пробе, группа четвертая;
• если в одной из примененных известных эритроцитов, то группа определяется по наличию или отсутствию свертываемости в капле.

Определение группы цоликлонами

Цоликлоны — это синтетические заменители сывороток. Они содержат искусственные заменители агглютининов ά и β. Их называют эритротестами «Цоликлон анти-А» (розового цвета) и «анти-В» (синего). Ожидаемая агглютинация происходит между эритроцитами исследуемой крови и агглютининами цоликлонов.

Методика не требует использования двух серий, считается более точной и надежной. Проведение и оценка результатов такие же, как в простом стандартном методе.

	Вид цоликлонов	Группа крови
Результат агглютинации	Анти-А	Анти-В
—	—	0(I)
+	—	A(II)
—	+	B(III)
+	+	AB(IV)

Особенность: четвертая группа АВ(IV) обязательно подтверждается реакцией агглютинации со специфическим цоликлоном «анти-АВ» и отсутствием неспецифического склеивания эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Метод позволяет определить группу и резус фактор в лаборатории и полевых условиях. В состав набора входит карточка с лунками. На дно лунок уже нанесены высушенные реагенты. Здесь, кроме «анти-А», «анти-В» и «анти-АВ» используется «анти-D», который дает результат резус-фактора.

Можно использовать кровь в любом виде, подойдет соединение с консервантом и взятая из пальца.

Перед исследованием на карточке записывается фамилия пациента, в каждую лунку вносится капля воды для растворения ингредиентов. Затем отдельными палочками в лунки с реактивами добавляют кровь и слегка перемешивают. Окончательный результат «читают» спустя три минуты.

Группа крови всегда перепроверяется при необходимости переливания. Одновременно контролируют групповую и индивидуальную совместимость. Ведь, на самом деле, в крови человека обнаружено гораздо больше антигенных свойств, чем в системе АВ0. Просто они у большинства населения слабо проявляются.

Но у пациента с тяжелыми заболеваниями, изменяющими свойства крови и аллергизирующими организм, они становятся определяющими, требуют считаться с наличием и уровнем в крови. Поэтому знание пациентом собственной группы добавляет уверенности в результате исследования.