Сыворотка сапная для реакции связывания комплемента
Состав
Препарат представляет собой сыворотку крови лошадей, иммунизированных убитой культурой Burkholderia mallei. Выпускается лиофильно высушенным.
Назначение
Сыворотка предназначена для контроля специфической активности сапного антигена в реакции связывания комплемента при исследовании сыворотки крови животных на содержание антител к возбудителю сапа.
Применение
Перед применением содержимое флакона растворяют в 4 см3 дистиллированной воды или физиологического раствора. Полученный после полного растворения содержимого флакона раствор используется как обычная нативная сыворотка. При постановке реакции используют разведение сыворотки в титре, указанном на упаковке.
Форма выпуска
Выпускается по 4 см3 во флаконах вместимостью 10 см3 по 80 доз препарата (титр 1:20). В коробке 20 флаконов.
Хранение
Сыворотка сапная сохраняет все заданные биологические свойства в течение 3 лет с даты изготовления при хранении её в темном, сухом месте при температуре от 2°С до 15°С.
Текст ГОСТ 17404-2017 Сыворотка сапная для реакции связывания комплемента. Технические условия
ГОСТ 17404-2017
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СЫВОРОТКА САПНАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Технические условия
Qlanders cerum for use in the complement fixation test. Specifications
МКС 11.220
Дата введения 2018-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») и Федеральным казенным предприятием «Курская биофабрика — фирма «БИОК» (ФКП «Курская биофабрика»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 июня 2017 г. N 51)
За принятие проголосовали:
|
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 |
Код страны по |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
|
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
|
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
|
Казахстан |
KZ |
Госстандарт Республики Казахстан |
|
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
|
Россия |
RU |
Росстандарт |
|
Таджикистан |
TJ |
Таджикстандарт |
|
Узбекистан |
UZ |
Узстандарт |
|
Украина |
UA |
Минэкономразвития Украины |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 19 июля 2017 г. N 723-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 17404-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2018 г.
5 ВЗАМЕН 17404-81*
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 17404-81. — .
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27.12.2022 N 1675-ст c 01.01.2023
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на сапную сыворотку для реакции связывания комплемента (далее — сыворотка). Сыворотку применяют для контроля специфической активности сапного антигена в реакции связывания комплемента (РСК) при диагностике сапа.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.0.004 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.008 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.2.003 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.3.002 Система стандартов безопасности труда. Процессы производственные. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.011 Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация
ГОСТ 1770 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
________________
В Российской Федерации действует ГОСТ Р 58144-2018.
ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ 9142 Ящики из гофрированного картона. Общие технические условия
ГОСТ 14192 Маркировка грузов
ГОСТ 16445-2012 Сыворотка гемолитическая для реакции связывания комплемента. Технические условия
ГОСТ 16446-2012 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия
ГОСТ ISO/IEC 17025 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ 17768 Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение
ГОСТ 24061 Средства лекарственные биологические лиофилизированные для ветеринарного применения. Метод определения массовой доли влаги
ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29230 (ИСО 835-4-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 4. Пипетки выдувные
ГОСТ 31929 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Правила приемки, методы отбора проб
ГОСТ 33781 Упаковка потребительская из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (www.easc.by) или по указателям национальных стандартов, издаваемым в государствах, указанных в предисловии, или на официальных сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации. Если на документ дана недатированная ссылка, то следует использовать документ, действующий на текущий момент, с учетом всех внесенных в него изменений. Если заменен ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, то следует использовать указанную версию этого документа. Если после принятия настоящего стандарта в ссылочный документ, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение применяется без учета данного изменения. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3 Требования безопасности
3.1 По биологической безопасности производство сыворотки должно соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.008.
3.2 Требования к обучению персонала безопасности труда и пожарной безопасности — по ГОСТ 12.0.004 и ГОСТ 12.1.004.
3.3 Средства защиты работающих — по ГОСТ 12.4.011, воздух рабочей зоны должен соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.005.
3.4 Производственное оборудование должно соответствовать требованиям ГОСТ 12.2.003, производственные процессы — ГОСТ 12.3.002.
3.5 Утилизация сыворотки с истекшим сроком годности и серий, не выдержавших контрольных испытаний, а также флаконов (ампул), оставшихся после испытаний и архивных образцов после истечения срока хранения не требует специальных мер безопасности.
4 Технические требования
4.1 Сыворотка представляет собой высушенную сыворотку крови лошадей, иммунизированных инактивированной культурой Burkholderia mallei или сапным эмульсин — антигеном.
4.2 Сыворотка должна соответствовать требованиям настоящего стандарта и производиться по технологическому регламенту, утвержденному в порядке, установленном государством, принявшим стандарт.
4.3 По показателям качества сыворотка должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.
Таблица 1
|
Наименование показателя |
Характеристика и норма |
|
Внешний вид, цвет, наличие механических примесей |
Пористая аморфная масса серовато-желтого цвета. В растворенном виде — опалесцирующая жидкость соломенно-желтого цвета. Наличие механических примесей не допускается |
|
Растворимость, мин |
9-10 |
|
Активность (титр), не ниже |
1:20 |
|
Отсутствие антикомплементарных свойств |
Без сапного антигена не должна вызывать задержку гемолиза эритроцитов |
|
Отсутствие гемолитических свойств |
Без антигена и комплемента не должна вызывать гемолиза эритроцитов |
|
Массовая доля влаги, %, не более |
3,0 |
4.4 Упаковка
4.4.1 Сыворотку расфасовывают по 2 см или 4 см
во флаконы вместимостью 10 см
или ампулы соответствующей вместимости и лиофильно высушивают. Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками, а ампулы запаивают.
Погрешность фасования составляет:
для одного флакона (ампулы) — ±8%,
для десяти флаконов (ампул) — ±2,5%.
Примечание — По согласованию с потребителем допускаются другие объемы расфасовки.
4.4.2 Флаконы (ампулы) с сывороткой упаковывают в картонные коробки или полистироловые коробки, или пачки по ГОСТ 33781 с разделительными перегородками, обеспечивающими целостность флаконов (ампул). В каждую коробку (пачку) вкладывают инструкцию по применению. Допускаются иные виды упаковки.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.4.3 Коробки (пачки) с сывороткой упаковывают в ящики из гофрированного картона по ГОСТ 9142 или другие аналогичные. Масса брутто ящиков не должна превышать 15 кг. Свободное пространство в ящиках должно быть заполнено прокладками из гофрированного картона, которые должны обеспечивать сохранность сыворотки. Внутрь каждого ящика вкладывают упаковочный лист с указанием:
— наименования организации-производителя и ее товарный знак;
— наименования сыворотки;
— числа коробок (пачек) в ящике;
— номера серии;
— даты упаковки;
— фамилии или номера упаковщика.
Примечание — Допускается не вкладывать упаковочный лист в транспортную упаковку.
4.5 Маркировка
4.5.1 Флаконы (ампулы) маркируют несмываемой краской по стеклу или наклеивают этикетки с указанием:
— наименования организации-производителя, ее адреса и товарного знака;
— наименования сыворотки;
— номера серии;
— даты производства (месяца и года);
— срока годности (надписи: «годен до»);
— количества сыворотки во флаконе (ампуле), см;
— числа доз во флаконе (ампуле);
— надписи: «Для ветеринарного применения».
На этикетку может быть нанесена дополнительная информация.
4.5.2 На каждую коробку (пачку) наносят маркировку с указанием:
— наименования, адреса, телефона и товарного знака организации-производителя;
— наименования сыворотки;
— номера серии;
— даты производства (месяца и года);
— срока годности (надписи: «годен до»);
— способа применения;
— количества сыворотки во флаконе (ампуле), см;
— числа доз во флаконе (ампуле);
— числа флаконов (ампул) в коробке (пачке);
— условий отпуска;
— условий хранения;
— надписи: «Для ветеринарного применения»;
— штрихового кода (при наличии);
— обозначения настоящего стандарта.
В каждую коробку (пачку) вкладывают инструкцию по применению.
4.5.3 На каждый ящик наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: «Хрупкое. Осторожно», «Пределы температуры», «Верх».
4.5.4 Маркировка ящика (транспортной упаковки), характеризующая упакованную продукцию, должна содержать:
— наименование и адрес (с указанием страны) организации-производителя;
— товарный знак организации-производителя;
— наименование сыворотки;
— номер серии;
— дату производства (месяц, год);
— число коробок (пачек) в ящике;
— срок годности (надпись: «годен до»);
— условия хранения и транспортирования;
— надпись: «Для ветеринарного применения»;
— массу брутто.
4.5.5 Совмещение транспортной маркировки и маркировки, характеризующей упакованную продукцию, на одной стороне транспортной упаковки не допускается.
5 Правила приемки
5.1 Каждая серия сыворотки должна быть принята в организации-производителе отделом, отвечающим за контроль качества готовой продукции в соответствии с ГОСТ 31929.
5.2 Серией сыворотки считают определенное количество препарата, произведенного за один технологический цикл и оформленного одним документом о качестве.
5.3 В документе о качестве указывают:
— наименование и адрес организации-производителя;
— наименование сыворотки;
— номер серии;
— объем серии (в единицах объема или штуках);
— дату производства (месяц, год);
— результаты испытаний по показателям качества;
— срок годности (надпись: «годен до»);
— обозначение настоящего стандарта;
— номер документа о качестве и дату его выдачи;
— подпись уполномоченного лица организации-производителя, выдавшего документ о качестве.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
5.4 Для контроля качества сыворотки от каждой серии методом случайного отбора в соответствии с ГОСТ 31929 делают выборку в количестве 30 флаконов (ампул): 15 флаконов (ампул) используют для проведения испытаний по показателям качества, указанным в таблице 1, а 15 флаконов (ампул) направляют в архив отдела, отвечающего за контроль качества готовой продукции. Пробы направляют в архив после получения положительных результатов испытаний по показателям качества и хранят в течение срока годности.
5.5 Архивные пробы маркируют надписью «Архив» и снабжают документом с указанием:
— наименования организации-производителя;
— наименования сыворотки;
— номера серии;
— даты производства (месяца и года);
— даты отбора проб;
— объема серии (в единицах объема или штуках);
— числа отобранных проб;
— должности и подписи лица, отобравшего пробы;
— срока годности (надписи: «годен до»);
— обозначения настоящего стандарта.
5.6 При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей проводят повторные испытания по этому показателю на удвоенном количестве проб сыворотки, взятых от той же серии. Результаты повторных испытаний считают окончательными и распространяют на всю серию.
5.7 В случае неудовлетворительных результатов повторных испытаний серию сыворотки считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта, ее бракуют и утилизируют. Утилизация сыворотки не требует специальных мер безопасности.
6 Методы испытаний
6.1 Условия выполнения испытаний
6.1.1 Общие требования к помещениям — по ГОСТ ISO 7218.
6.1.2 Требования к персоналу — по ГОСТ ISO/IEC 17025.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.2 Аппаратура, средства измерений, реактивы, посуда и материалы
Холодильник бытовой.
Баня водяная с терморегулятором, обеспечивающая поддержание заданной температуры.
Центрифуга со скоростью вращения 3000 об/мин.
рН-метр, обеспечивающий измерение с точностью до ±0,05 ед. рН, разрешением 0,01 ед. рН, оснащенный ручным или автоматическим определителем температуры.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233.
0,9%-ный раствор натрия хлорида изотонический, рН (6,8-7,2 ед. рН).
Эритроциты барана (2,5%-ная взвесь в 0,9%-ном растворе натрия хлорида изотонического), приготовленные по ГОСТ 16445-2012 (подпункт 5.4.2.2).
Сыворотка гемолитическая для РСК по ГОСТ 16445.
Сыворотка сапная контрольная (положительная сыворотка с установленным значением активности лиофилизированная).
Сыворотка лошадей негативная (не содержащая антител к возбудителю сапа).
Антиген контрольный (сапной антиген с установленным значением активности).
Комплемент сухой для РСК по ГОСТ 16446.
Цилиндры мерные, колбы стеклянные по ГОСТ 1770.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336.
Микропипетки вместимостью от 0,2 до 1,0 см.
Пипетки стеклянные мерные вместимостью 1, 5 и 10 см по ГОСТ 29230.
Пипетки пастеровские.
Штатив для пробирок.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, а также реактивов, посуды и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.3 Определение внешнего вида, цвета, наличия механических примесей
Для определения внешнего вида, цвета все флаконы (ампулы) с сывороткой просматривают визуально в проходящем свете. Одновременно проверяют целостность флаконов (ампул) и правильность маркировки.
Примечание — Наличие механических примесей проверяют в растворенном виде.
6.4 Определение растворимости
Для определения растворимости в три флакона (ампулы) пипеткой вносят 0,9%-ный раствор натрия хлорида изотонического, приготовленного по 6.5.2.1, в количестве, равном объему сыворотки до высушивания, и осторожно встряхивают. Сыворотка должна полностью раствориться в течение 9-10 мин.
6.5 Определение активности (титра), отсутствия антикомплементарных и гемолитических свойств
6.5.1 Активность определяется титром сыворотки, являющимся ее наибольшим разведением, вызывающим полную задержку гемолиза эритроцитов (отсутствие гемолиза) с антигеном в рабочем разведении.
6.5.2 Подготовка к испытанию
6.5.2.1 Приготовление 0,9%-ного раствора натрия хлорида изотонического
9 г натрия хлорида растворяют в 1 дм дистиллированной воды или воды для инъекций. рН раствора должно быть в пределах 6,8-7,2 ед. рН.
6.5.2.2 Приготовление разведений сыворотки
Готовят разведения сыворотки в 0,9%-ном изотоническом растворе хлорида натрия в соотношении 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80, контрольной сапной сыворотки — в соотношении 1:10, негативной сыворотки — в соотношении 1:5 и все разведения инактивируют в водяной бане при температуре (58,5±0,5)°С в течение 30 мин.
6.5.2.3 В соответствии с ГОСТ 16446-2012 (пункт 6.6.2) готовят гемолитическую систему, состоящую из равных объемов 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и раствора гемолитической сыворотки в рабочем разведении. Эритроциты центрифугируют при скорости вращения 3000 об/мин в течение 10 мин. Полученную гемолитическую систему помещают в водяную баню при температуре (37,5±0,5)°С на 20 мин для сенсибилизации эритроцитов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.5.2.4 Устанавливают титр комплемента в соответствии с ГОСТ 16446 -2012 (подраздел 6.6). Для постановки реакции комплемент берут в количестве на два интервала больше его титра. Так, например, при титре комплемента 0,1 его рабочая доза будет 0,14.
Затем готовят 10 см
комплемента в рабочей дозе, для чего вносят в пробирку 9,65 см
0,9%-ного раствора хлорида натрия изотонического и добавляют комплемент в объеме 0,35 см
при его рабочей дозе 0,14 см
.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.5.2.5 Готовят рабочее разведение контрольного антигена 1:100 (к 9,9 см 0,9%-ного раствора хлорида натрия изотонического добавляют 0,1 см
сапного антигена).
6.5.3 Проведение испытания
РСК ставят в общем объеме 1,0 см. Разведения сывороток, антигена и комплемента вносят в указанной последовательности по 0,2 см
в пробирки и одновременно ставят контрольные пробирки в соответствии с таблицей 2. В контрольные пробирки вместо недостающих компонентов вносят по 0,2 см
0,9%-ного раствора хлорида натрия изотонического.
Таблица 2 — Схема и результаты постановки РСК (пример)
|
Компоненты |
Разведения сыворотки |
Контроль |
||||||||
|
1:5 |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
Контрольная сапная сыворотка в разведении 1:10 |
Негативная сыворотка в разведении 1:5 |
Без сыворотки |
Без сыворотки и комплемента |
||
|
Антиген контрольный в разведении 1:100 |
0 |
0 |
0 |
2 |
30 |
0 |
100 |
100 |
0 |
|
|
Контроль |
Без антигена |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
Без антигена и комплемента |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
|
Примечание — В таблице приведены значения степени задержки гемолиза эритроцитов в процентах. |
Штативы с пробирками встряхивают и выдерживают 20 мин в термостате (водяной бане) при температуре (37±1)°С. Затем во все пробирки вносят гемолитическую систему по 0,4 см и снова помещают в термостат (водяную баню) на 20 мин. Реакцию учитывают визуально через 15-18 ч после выдерживания при температуре от 4°С до 12°С.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
6.5.4 Обработка результатов
Реакцию оценивают по степени гемолиза эритроцитов в процентах.
Титр сыворотки, то есть наибольшее ее разведение, вызывающее полную задержку гемолиза эритроцитов (отсутствие гемолиза) с антигеном в рабочем разведении, должен быть не ниже 1:20.
Сыворотку считают не обладающей антикомплементарными и гемолитическими свойствами, если в пробирках контроля без антигена эритроциты полностью гемолизируются (100% гемолиза), а в пробирках контроля без антигена и комплемента наступает полная задержка гемолиза эритроцитов (отсутствие гемолиза).
6.6 Определение массовой доли влаги
Массовую долю влаги определяют по ГОСТ 24061.
7 Транспортирование и хранение
7.1 Сыворотку транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с ГОСТ 17768 при температуре от 2°С до 15°С.
7.2 Допускается транспортировать сыворотку при температуре не выше 25°С в течение не более 20 сут.
7.3 Сыворотку хранят в защищенном от света месте в упаковке производителя при температуре от 2°С до 15°С в пределах срока годности.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
7.4 Срок годности сыворотки — три года с даты производства. Датой производства сыворотки считают дату расфасовки.
|
УДК 619:616.98:006.35 |
МКС 11.220 |
|
Ключевые слова: сыворотка сапная, реакция связывания комплемента, гемолитические свойства, антикомплементарные свойства, активность |
Редакция документа с учетом
изменений и дополнений подготовлена
СОСТАВ Препарат представляет собой сыворотку крови лощадей, гипериммунизированную убитой культурой возбудителя сапа. Выпускается стерильным, лиофильно высушенным.
НАЗНАЧЕНИЕ
Сыворотка предназначена для контроля специфической активности сапного антигена в реакции связывания комплемента при исследовании сыворотки крови животных на содержание антител к возбудителю сапа.
ПРИМЕНЕНИЕ
Перед применением содержимое флакона растворяют в 4 мл дистиллированной воды или физиологического раствора. Полученный, после полного растворения содержимого флакона, раствор используется как обычная нативная сыворотка. При постановке реакции используют разведение сыворотки в титре, указанном на упаковке.
ФОРМА ВЫПУСКА
Выпускается во флаконах вместимостью 10 мл по 80 доз препарата. В коробке 20 флаконов.
ХРАНЕНИЕ
Сыворотка сапная сохраняет все заданные биологические свойства в течение 3 лет с даты изготовления при хранении её в темном, сухом месте при температуре от 2 до 15 ° С.
ОКП 93 8854
Срок действия с 01.01.83
до 01.01.88*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России
от 30.06.92 N 620 (ИУС N 9, 1992 год). —
Примечание.
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ
А.Н.Шаров, Н.К.Букова, Н.Д.Насокина, А.А.Гринев, А.Н.Косякин
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А.Д.Третьяков
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 31 декабря 1981 г. N 5970
ВЗАМЕН ГОСТ 17404-72
Настоящий стандарт распространяется на сапную сыворотку, представляющую собой высушенную сыворотку крови лошадей, иммунизированных экстрактом или суспензией сапных бактерий, убитых нагреванием.
Сапная сыворотка предназначается для контроля специфической активности сапного антигена в реакции связывания комплемента (РСК) при диагностике сапа.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Сапная сыворотка должна изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.
1.2. По физическим и биологическим свойствам сапная сыворотка должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
|
Наименование показателя |
Характеристика и норма |
|
Внешний вид |
Пористая аморфная масса серовато-желтого цвета |
|
Растворимость |
Легко растворима в физиологическом растворе |
|
Однородность в растворе |
В растворенном виде представляет собой прозрачную жидкость соломенно-желтого цвета без каких-либо механических примесей |
|
Активность (титр), не ниже |
1:20. |
|
Отсутствие антикомплементарных свойств |
Без сапного антигена не должна вызывать задержку гемолиза эритроцитов |
|
Отсутствие гемолитических свойств |
Без антигена и комплемента не должна вызывать гемолиза эритроцитов |
|
Массовая доля влаги, %, не более |
3,0 |
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Сапную сыворотку принимают сериями. Под серией следует понимать любое количество сапной сыворотки, полученное за один технологический цикл в одной емкости. Серия должна иметь свой номер, номер государственного контроля и оформлена одним документом о качестве.
2.2. Каждая серия сапной сыворотки должна быть принята на предприятии-изготовителе государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Внешний вид сапной сыворотки определяют по каждой ампуле (флакону) всей серии препарата.
2.4. Для контроля качества сапной сыворотки от каждой серии отбирают 40 ампул (флаконов) препарата.
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания удвоенного количества ампул (флаконов) с препаратом.
Результаты повторных испытаний распространяются на всю серию.
2.6. Контроль качества сапной сыворотки по требованию потребителя проводит государственный контролер или Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Метод отбора проб
3.1.1. Ампулы (флаконы) отбирают из разных мест нескольких упаковок. 20 ампул (флаконов) используют для испытаний, а 20 оставляют в архиве государственного контролера на 4 года.
3.2. Для определения внешнего вида ампулы (флаконы) с сапной сывороткой просматривают.
3.3. Растворимость сапной сыворотки устанавливают, растворяя в течение 5 мин препарат в физиологическом растворе, взятом в объеме, указанном на ампуле (флаконе) с сапной сывороткой.
3.4. Однородность в растворе определяют визуально в проходящем свете при периодическом встряхивании ампулы (флакона).
3.5. Определение активности (титра), отсутствия антикомплементарных и гемолитических свойств сапной сыворотки
3.5.1. Аппаратура и реактивы
Холодильник бытовой.
Баня водяная с терморегулятором.
Центрифуга на 3 тыс. об/мин.
Потенциометр ЭВ-74 или прибор того же класса точности.
Пипетки пастеровские.
Пипетки мерные по ГОСТ 20292-74 вместимостью 1, 2, 5, 10 см.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-75.
Цилиндры мерные по ГОСТ 1770-74.
Колбы стеклянные по ГОСТ 1770-74.
Штативы для пробирок.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
Комплемент по ГОСТ 16446-78.
Гемолизин по ГОСТ 16445-78.
Эритроциты барана.
Сыворотка лошадей неспецифическая (негативная).
Антиген сапной контрольный.
Сыворотка сапная контрольная или референс-препарат сыворотки с установленной активностью.
Примечания:
1. Под контрольной серией сапного антигена и контрольной серией сапной сыворотки понимают серии, апробированные для этой цели Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР и используемые в течение срока их годности. Титр сыворотки должен быть не ниже 1:80.
2. Под референс-препаратом сыворотки понимают глобулиновую фракцию белков с известной биологической активностью в единицах действия, выделенную из сапной сыворотки.
3.5.2. Подготовка к испытанию
3.5.2.1. Готовят физиологический раствор рН 6,8-7,2.
3.5.2.2. Готовят разведения испытуемой сыворотки на физиологическом растворе 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80, контрольной сапной сыворотки или референс-препарата сыворотки 1:10, негативной сыворотки 1:5 и инактивируют в водяной бане при 58-59 °С в течение 30 мин.
3.5.2.3. В соответствии с требованиями ГОСТ 16446-78 на комплемент готовят гемолитическую систему, состоящую из равных объемов 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и раствора гемолизина в рабочем разведении. Полученную гемсистему помещают в водяную баню при 37 °С на 30 мин для сенсибилизации эритроцитов.
3.5.2.4. Устанавливают титр комплемента в соответствии с требованиями ГОСТ 16446-78.
Для применения в реакции комплемент берут в количестве, на два интервала большем его титра. Так, например, при титре комплемента 0,19 его рабочая доза будет 0,25. Затем готовят 10 см комплемента в рабочей дозе, для чего вливают в пробирку комплемент в объеме, равном показателю его рабочего разведения (в примере — 0,25 см
) и добавляют в пробирку физиологический раствор до общего объема жидкости 10 см
.
3.5.2.5. Готовят рабочее разведение контрольного антигена 1:100 на физиологическом растворе.
3.5.3. Проведение испытания
Разведения сывороток, антигена и комплемента разливают в указанной последовательности по 0,5 см в пробирки, одновременно ставят контрольные пробирки в соответствии с требованиями табл.2. В контрольные пробирки вместо недостающих компонентов вносят по 0,5 см
физиологического раствора.
Таблица 2
Схема и результаты постановки РСК (пример)
|
Испытуемая сыворотка |
Контроль |
|||||||||
|
Разведение антигена |
1:5 |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
Позитивная сыворотка 1:10 |
Негативная сыворотка 1:5 |
Без сыворотки |
Без сыворотки и комплемента |
|
|
1: 100 |
0 |
0 |
0 |
2 |
30 |
0 |
100 |
100 |
0 |
|
|
Контроль |
Без антигена |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
|
Без антигена и комплемента |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
Штативы с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при 37 °С на 20 мин.
Затем в пробирки вносят гемолитическую систему в объеме по 1 см и снова помещают в баню на 20 мин.
После бани штатив с пробирками выдерживают 15-18 ч при температуре 4-12 °С.
3.5.4. Обработка результатов
Реакцию оценивают по степени гемолиза эритроцитов в процентах.
Титром сыворотки считают наибольшее ее разведение, вызывающее полную задержку гемолиза эритроцитов (отсутствие гемолиза) с антигеном в рабочем разведении. Титр сыворотки должен быть не ниже 1:20.
Сыворотку считают не обладающей антикомплементарными и гемолитическими свойствами, если в пробирках контроля без антигена эритроциты полностью гемолизируются (100% гемолиза), а в пробирках контроля без антигена и комплемента происходит полная задержка их гемолиза (отсутствие гемолиза).
3.6. Массовую долю влаги определяют по ГОСТ 24061-80.
4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
4.1. Сапная сыворотка должна фасоваться по 1 или 2 см в стерильные ампулы ШПВ-6 или БЦЖ-6 или по 4 см
во флаконы для медицинских препаратов вместимостью 10 см
и лиофильно высушена.
Ампулы должны быть запаяны под вакуумом, флаконы заполнены стерильным азотом или стерильным осушенным воздухом, закрыты резиновыми пробками и закатаны алюминиевыми колпачками.
4.2. На ампулах (флаконах) должно быть указано сокращенное наименование препарата — «сапсыворотка» и номер серии.
4.3. По 20 ампул (флаконов) с сапной сывороткой должно быть упаковано в картонные коробки с разделительными перегородками. На каждой коробке должна быть этикетка, на которой указывают:
наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;
наименование препарата;
количество ампул (флаконов);
количество препарата в ампуле (флаконе), см;
номер серии;
номер госконтроля;
дату изготовления;
срок годности;
титр;
условия хранения;
номер браковщика и упаковщика;
обозначение настоящего стандарта.
4.4. Коробки с ампулами (флаконами) сапной сыворотки упаковывают в деревянные или фанерные ящики массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:
наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;
наименования препарата;
количества коробок в ящике;
номера серии;
даты упаковки;
фамилии или номера упаковщика.
4.5. Маркировку грузов наносят по ГОСТ 14192-77 с указанием следующих данных:
наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;
наименования потребителя и его адреса;
наименования препарата;
количества препарата в ящике;
номера серии препарата;
срока годности;
массы брутто;
условий хранения и транспортирования;
даты изготовления;
обозначения настоящего стандарта;
предупредительной надписи «Биопрепараты» и манипуляционных знаков «Осторожно, хрупкое», «Боится нагрева», «Боится сырости», «Боится мороза», «Верх, не кантовать».
4.6. Сапную сыворотку транспортируют всеми видами транспорта при температуре 2-15 °С с соблюдением правил перевозки грузов, действующих на данном виде транспорта. Допускается транспортировать сапную сыворотку при более высокой температуре, но не выше 25 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более 20 сут.
4.7. Сапную сыворотку хранят в сухом темном помещении при температуре 2-15 °С.
5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ
5.1. Изготовитель гарантирует соответствие сапной сыворотки требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий применения, транспортирования и хранения.
5.2. Гарантийный срок хранения сапной сыворотки — 3 года со дня ее изготовления.
2013.06.20
18 июня 2013 года наш врач акушер-гинеколог, кандидат медицинских наук Беришвили Манана Владимировна награждена медалью «Отличник здравоохранения России»
Описание
Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК дает заведомо положительные результаты в РСК в присутствии трепонемного и ультраозвученного антигенов.
Форма выпуска
Лиофилизат из 1 мл, 10 ампул) в пачке из картона
Состав
Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, cлабоположительная для РСК представляет собой лиофилизированную сыворотку крови кроликов, с добавлением консерванта и стабилизатора.
Состав компонента изделия на 1 ампулу до лиофилизации:
— cыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК — 0,6132 мл
— тиомерсал (мертиолят) — 0,0617 мг
> — вода для инъекций 0,0062 мл натрия хлорида 0,9 % раствор — 0,4026 мл
— сахар белый (кусковой или кристаллический) — 0,1027 г
Показания для применения
Предназначен для контроля правильности результатов при постановке реакции связывания комплемента (РСК) с сыворотками больных сифилисом.
Способ применения
Тип анализируемого образца – сыворотка крови человека.
Все работы по взятию, транспортированию и подготовке проб клинического материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», МУ 4.2.2039-05 «Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории. Методические указания».
Для отбора проб используют чистую стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов. При необходимости стерилизацию посуды и других средств забора материала проводят автоклавированием или сухим жаром.
Для получения достоверных результатов рекомендуется исследовать материал непосредственно же после забора. Все исследуемые образцы должны быть промаркированы.
Перед использованием сыворотки инактивировать на водяной бане при (56±0,1) ºС в течение 30 мин для инактивации комплемента.
ПОДГОТОВКА КОМПОНЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА)
Содержание ампулы непосредственно перед постановкой РСК растворить в 1 мл раствора натрия хлорида 0,9% (рН 7,3±0,1). После полного растворения, инактивировать на водяной бане или инактиваторе сывороток при (56±0,1) ºС в течение 30 мин с целью разрушения комплемента и использовать в качестве контрольной сыворотки.
Подготовку реагентов, используемые для РСК (Сыворотка диагностическая гемолитическая жидкая; Комплемент сухой; Антиген трепонемный ультраозвученный для РСК; Антиген кардиолипиновый ультраозвученный для РСК; Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, отрицательная для РСК; Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, слабоположительная для РСК) осуществлять согласно инструкции по применению реагентов.
Приготовление гемолитической системы. Смешивание сыворотки гемолитической диагностической с эритроцитами барана проводят по возможности быстро, причем гемолитическую сыворотку следует добавлять к взвеси эритроцитов. Для этого в стакан с 50 мл 3% раствора эритроцитов барана добавить небольшими порциями 50 мл гемолитической сыворотки разведенной по утроенному титру. Смесь выдерживают в термостате при температуре (37±1) оС в течение 30 мин для сенсибилизации эритроцитов.
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА)
Для постановки РСК инактивированные контрольные сыворотки (отрицательную, слабоположительную, положительную для РСК), испытуемые образцы разводят 1:5 (т.е. к 0,05 мл сыворотки прибавляют 0,2 мл раствора натрия хлорида 0,9%) разливают по 0,25 мл в пробирки (для каждой сыворотки используют 3 пробирки), в первую пробирку добавляют 0,25 мл разведенного по титру антигена трепонемного ультраозвученного, во вторую – 0,25 мл разведенного по титру антигена кардиолипинового, а в третью (контрольную) – 0,25 мл раствора натрия хлорида 0,9%. Затем во все пробирки вносят 0,25 мл комплемента (для постановки РСК приготовить раствор комплемента с 30-50 % надбавкой к титру), помещают в термостат. Через 45 мин инкубации при температуре (37±1) °С во все пробирки вносят по 0,5 мл гемолитической системы. Встряхивают, вновь помещают в термостат на 45-60 мин до наступления гемолиза в контрольных пробирках, содержащих раствор натрия хлорида 0,9%.
Таблица
Схема постановки качественной реакции Вассермана (РСК)
|
Ингредиенты, мл |
Номер пробирки |
||
|
1 |
2 |
3(к) |
|
|
Исследуемая сыворотка инактивированная, разведенная 1:5 и отрицательная, слабоположительная, положительная контрольные сыворотки для РСК |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
Антиген трепонемный ультраозвученный, разведенный по титру |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
Антиген,кардиолипиновый разведенный по титру |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
Натрия хлорида раствор 0,9 % |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
Комплемент, разведенный по рабочей дозе |
0,25 |
0,25 |
0,25 |
|
Встряхивают. помещают в термостат при температуре 37±1 °С на 45 мин |
|||
|
Гемолитическая система |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
|
Встряхивают, помещают в термостат при температуре 37±1 °С на 45-60 мин. |
РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Для оценки результатов РСК используют систему четырех плюсов:
4+ − (резко положительная реакция) полная задержка гемолиза.
3+ − (положительная реакция) значительная задержка гемолиза.
2+ − (слабоположительная реакция) частичная задержка гемолиза).
1+ − (сомнительная реакция) незначительная задержка гемолиза.
Отрицательный результат – полный гемолиз эритроцитов.
Медицинское изделие «Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК» должно задержку гемолиза не менее чем на 4+ с кардиолипиновым и трепонемным ультраозвученным антигенами в реакции связывания комплемента (РСК) в разведении 1:10, при этом контрольная отрицательная сыворотка, должна давать полный гемолиз.
Меры предосторожности при применении
Класс потенциального риска применения – 2б.
Изделие является безопасным, не приносит вреда окружающей природной среде и здоровью человека при транспортировании, хранении, применении. Компоненты изделия являются негорючими, невзрывоопасными, не способными самовозгораться, не радиоактивными, нетоксичными, не обладают канцерогенным, мутагенным действием или отрицательно влияющим на репродуктивную функцию человека, в том числе не образуют токсичных соединений с другими веществами, не обладают кумулятивными свойствами.
Изделие содержит материал животного происхождения: сыворотку крови кроликов, безопасность которой подтверждена. Сыворотка кролика, используемая в производстве, получена от животных, прошедших ветеринарный контроль и находящихся под наблюдением специалиста.
Изделие содержит тиомерсал в качестве консерванта в субтоксических концентрациях. Ввиду низкой концентрации тиомерсала в сыворотке токсичное действие при надлежащем использовании можно исключить. Следует избегать контакта сыворотки, содержащей консервант, с кожей и слизистыми, а при случайном контакте промыть большим количеством воды.
Однако исследуемые образцы, а также их растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, следует рассматривать как потенциально инфицированные. При работе следует соблюдать правила техники безопасности в соответствии с:
— ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) «Лаборатории медицинские. Требования безопасности»;
— СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней»;
— СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней;
— СП 1.3.2885-11 «Дополнения и изменения № 2 к СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
При работе с потенциально-инфицированными биологическими образцами, оборудованием, материалами, изделиями, находящимися с ними в контакте, следует соблюдать осторожность:
– работать с применением индивидуальных средств защиты (защитной одежды, одноразовых резиновых перчаток, защитного экрана или очков);
– не пипетировать ртом;
– в случае пролива образцов и рабочих растворов на рабочие поверхности, необходимо проводить дезинфекционную обработку с использованием дезинфицирующих средств, разрешенных к использованию на территории РФ;
– инструменты и оборудование (после работы) подвергать обработке с использованием дезинфицирующих средств и оборудования, разрешенных к использованию на территории РФ;
– избегать образования аэрозолей, попадания исследуемых образцов и их растворов, компонентов изделия в рот, их проглатывания, контакта с кожей и слизистыми оболочками;
– утилизировать все использованные материалы, а также их растворы, исследуемые образцы и их растворы в соответствии с действующими санитарными правилами и нормами.